NLRP3炎性小体在抗CP型BVDV感染中的调控作用及机制.pdfVIP

摘要 摘 要 牛病毒性腹泻病毒 （BovineViralDiarrheaVirus，BVDV）为单股正链RNA 病毒，属 于黄病毒科、瘟病毒属成员。研究表明BVDV 急性感染牛表现白细胞减少和免疫抑制。 NLRP3 炎性小体是宿主天然免疫系统的一个重要成员，参与了针对多种病原体的宿主防御 反应，可招募和激活半胱氨酸蛋白酶-1 （Caspase-1），进而介导炎性细胞因子IL-1β/IL-18 的分泌，诱发免疫反应。Morales-AguilarA 等研究发现BVDV 感染牛单核巨噬细胞可通过 触发Caspase-1依赖性途径介导IL-1β释放，且该途径的活化影响BVDV 复制，表明NLRP3 炎性小体可能参与BVDV 的致病机制。为此，本研究以BVDV 感染小鼠和牛腹腔巨噬细 胞为研究模型，以NLRP3 炎性小体为研究对象，深入探究BVDV 感染诱发NLRP3 炎性小 体的活化规律及其对BVDV 复制的影响，该研究为BVDV 的防控提供理论依据。 首先，为了确定BVDV 急性感染与NLRP3 炎性小体活化的相关性，选取4-6 周龄雌 性SPF 级BALB/c 小鼠进行CP 型BVDV （NADL 株）攻毒试验。结果显示，BVDV 感染 能够引起小鼠脾脏和十二指肠的病理变化，并在不同时间点的十二指肠、脾脏和血液中检 测到病毒粒子，其中在感染第7d 时病毒载量达到峰值，证明BVDV 感染小鼠模型成功。 另外，研究发现BVDV 感染早期 （1d、2 d、4 d）小鼠十二指肠中NLRP3、Caspase-1和 IL-1βmRNA 和蛋白表达水平均明显升高，1d 时变化最为显著。然而，在BVDV 感染后 期 （7d、10d）NLRP3 炎性小体相关蛋白的表达却明显降低，其中第7d 下降最为显著。 以上研究表明，NLRP3 炎性小体可能参与了BVDV 致病过程。 其次，为明确NLRP3 炎性小体在BVDV 感染小鼠中的作用，分别采用NLRP3 炎性小 体抑制剂MCC950和激动剂Nigericin 处理，并通过NLRP3基因缺失小鼠进一步验证。结 果显示，在BVDV 感染1d 时，体内抑制和敲除NLRP3基因显著抑制了Caspase-1和IL-1β 的蛋白表达，并且均可显著增加小鼠十二指肠、脾脏和血液中BVDV 载量，表明NLRP3 炎性小体在BVDV 感染前期被活化，抑制其激活有利于病毒的复制。鉴于BVDV 感染第7 d 时，NLRP3 炎性小体活化被抑制。试验进一步采用Nigericin 处理小鼠，发现Nigericin 明显减少了十二指肠、脾脏和血液中BVDV 的载量，表明NLRP3 炎性小体在BVDV 感染 后期被抑制，其活化具有抗BVDV 感染的作用。 最后，为了进一步明确BVDV 感染对牛腹腔巨噬细胞中NLRP3 炎性小体活化的影响 以及NLRP3 炎性小体对BVDV 复制的调控作用，分别收集BVDV 不同感染复数及不同感 染时间的细胞样本，IFA 结果表明，4MOIBVDV 感染24h 时，NLRP3 活化程度最为明显。 I NLRP3 炎性小体在抗CP 型BVDV 感染中的调控作用及机制 为进一步探究NLRP3 炎性小体对BVDV 复制的影响，采用MCC950 处理细胞，MCC950 可以显著促进BVDV 的复制，与小鼠体内试验结果相一致。 综上所述，研究结果表明，BVDV 感染早期激活了小鼠和牛腹腔巨噬细胞中NLRP3 炎性小体，并依赖Caspase-1通路促进了IL-1β的表达。抑制NLRP3 炎症小体的活化，可 促进BVDV 的复制。本研究为BVDV 拮抗宿主先天性免疫的机制研究提供了理论依据。 关键词：牛病毒性腹泻病毒；NLRP3 炎性小体；BALB/c 小鼠；牛腹腔巨噬细胞；病毒载 量 II 目 录 目 录 摘 要I AbstractIII 1 文献综述1 1.1 牛病毒性腹