DGAT2在临床型酮病奶牛脂肪细胞脂解及自噬中的调控作用.pdfVIP

摘要 摘要 酮病是围产期奶牛高发的一个重要营养代谢性疾病，在世界各地奶牛群中发病率均 居高不下，奶牛患病后会对其他疾病易感性增加，且导致生殖性能大幅度降低，给养殖 业和乳品业造成巨大经济损失。由于奶牛产后干物质摄入量 （DMI）降低，而泌乳量和营 养需求增加，导致机体进入能量负平衡 （NEB）状态。为了维持稳态，机体进行脂肪动 员。脂肪组织的过度脂解导致血液和乳汁中的β-羟基丁酸 （BHB）和游离脂肪酸 （FFA） 浓度升高，导致脂肪组织炎症和免疫细胞浸润，最终影响泌乳性能并增加疾病易感性。 因此，脂肪组织的代谢适应对于奶牛成功渡过围产期至关重要。二酰基甘油酰基转移酶 （DGAT）是一种催化二酰甘油与脂肪酸酰基结合生成甘油三酯 （TAG）的关键酶，包括 DGAT1和DGAT2 两种亚型，在脂代谢调控中具有重要作用。自噬是维持细胞稳态并适 应细胞内或周围环境改变所带来的的变化和刺激的重要适应机制，也被认为是一个关键 的细胞保护通路。脂肪组织中自噬的失调会影响体内脂肪的积累。我们前期的研究证明， DGAT2 在酮病奶牛脂肪组织中低表达。而DGAT2 对围产期奶牛脂肪动员过程中自噬的 调节作用尚不明确。因此，我们提出DGAT2 可能参与调节酮病奶牛脂肪组织脂代谢及自 噬的科学假设，拟深入探讨DGAT2 对脂肪组织脂解的调节作用，以及其对脂肪组织自噬 信号通路激活的影响，明确DGAT2 在酮病奶牛脂肪组织剧烈脂解过程中对自噬是否存在 调控作用。这为调节酮病奶牛脂肪组织自噬的发生提供新思路。 在本研究中，我们分别进行了体内和体外试验，以探究DGAT2 在酮病奶牛脂肪组织 自噬中的作用。在体内试验中，选取健康和酮病奶牛各10 头。采集脂肪组织样本，利用 H.E.染色技术对脂肪组织进行染色观察酮病奶牛脂肪组织病理学变化，结果表明酮病奶牛 脂肪细胞体积较大且处于脂解剧烈的状态。并对DGAT2、脂解相关分子及自噬相关分子 的蛋白丰度进行检测。在体外试验中，首先分离并培养原代牛脂肪细胞，通过油红染色 鉴定牛脂肪细胞分化成熟。异丙肾上腺素 （ISO）是一种儿茶酚胺激素，可促进脂肪动员 并显著提高脂解率。因此，在本研究中，利用ISO 作为脂肪分解激动剂。细胞分化为成 熟的脂肪细胞后根据不同的处理被分为7 组：对照组、ISO 组、转染过表达DGAT2 腺病 毒组 （Ad-DGAT2）、添加ISO 并转染过表达DGAT2 腺病毒组 （Ad-DGAT2+ISO）、添加 DGAT2 抑制剂PF组 （PF、添加ISO及DGAT2 抑制剂PF 组 （PFISO）。处理结束后收集细胞，对细胞中脂代谢相关分子分子HSL、p- HSL 和ATGL 及自噬相关分子Beclin1、SQSTM1、LC3、PI3K、AKT 和mTOR 的蛋白表 I DGAT2 在酮病奶牛脂肪组织自噬中的作用研究 达水平进行检测。通过体内及体外试验进而明确DGAT2 对酮病奶牛脂肪组织及细胞自噬 是否存在调控作用。 体内试验结果显示：与健康奶牛相比，酮病奶牛脂肪组织中脂代谢相关分子HSL、p- HSL 和ATGL，及自噬相关分子Beclin1、SQSTM1、LC3和PI3K 的蛋白表达水平显著升 高 （P 0.01），而DGAT2 和负调节自噬相关分子AKT 和mTOR 的蛋白表达水平显著降 低 （P 0.01）。以上结果说明，酮病奶牛的脂肪组织脂解剧烈，自噬也较为活跃。 体外试验结果显示：ISO 可上调牛脂肪细胞中脂解相关分子HSL、p-HSL 和ATGL 和自噬相关分子Beclin1、SQSTM1、LC3和PI3K 的蛋白表达水平。ISO 可降低脂肪细胞 中负调节自噬相关分子AKT 和mTOR 的蛋白表达水平。分别对牛脂肪细胞进行转染 DGAT2 腺病毒或添加DGAT2 抑制剂，以确定DGAT2 对牛脂肪细胞脂解和自噬的调节作 用。当转染过表达DGAT2 腺病毒12h 后或添加DGAT2 抑制剂PF0.5h 后，添 加ISO 刺激3h，结果发现，过表达DGAT2 可抑制牛脂肪细胞中ISO 诱导的脂解相关蛋 白HSL、p-HSL 和ATGL 和自噬相关分子Beclin1、SQSTM1、LC3和PI3K