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PAGE2 / NUMPAGES2 荧光电子内窥镜原理与结构组成 本篇主要介绍荧光内窥镜的定义，原理及组成，简要介绍了荧光内窥镜中荧光分子探针的结构与性能，重点介绍了内窥镜光学系统中摄像系统、冷光源、数据处理系统的组成以及参数要求。 传统白光成像缺乏疾病特异性的光学特征，无法定位和可视化癌前病变，另外某些疾病病变的弥漫性和斑片状，进一步阻碍了检测。随着技术进一步发展，逐渐开始进行提高病变组织识别率的技术探索：窄带成像方法、激光共聚焦成像方法、自体荧光成像和光学分子成像1。本文以下内容主要介绍光学分子成像。 光学分子成像技术使用荧光标记物与生物体内的小分子、蛋白质或者抗体等结合，借助这些荧光标记物进行诊断。在激发光的激发下，标记的肿瘤细胞等病变组织与正常组织图像呈现出高对比，医生可以观察肿瘤大小、轮廓等信息，从而监测肿瘤的生长、位置转移等状态。在肿瘤切除手术过程中，通过对肿瘤组织结构进行荧光标记，实时显示肿瘤区域荧光图像，可以帮助外科医生对肿瘤形状等特征进行判别，从而实现与正常健康组织区分，达到精准治疗的目的。 一、荧光 1.1荧光分类以及原理 物质产生荧光的原因大概可以分为几类： （1）光致荧光：由可见光激发的荧光； （2）化学荧光：由化学反应引起的荧光； （3）X射线荧光：由X射线引起的荧光； （4）激光荧光：由激光引起的荧光； （5）生物发光：在有生命的生物体中产生的荧光。 荧光内窥镜的荧光产生主要是激光激发。 可见光的波长范围为380-760nm，红外的波长范围大约在0.76-50μm之间。当荧光物质被外界特定能量（如激光等）激发，会引起荧光物质的电子由低能级（基态）跃迁至高能级（激发态），然后电子又会由高能级释放能量回归低能级。在由高能级向低能级跃迁的过程中，电子会释放能量，能量以一定频率光波的形式被释放，产生的光波为荧光。 图荧光产生的原理图 1.2荧光探针 荧光探针是荧光成像技术最重要的载体。荧光探针主要由目标底物的识别基团和荧光染料两部分构成，在目标物的作用下，识别基团从探针分子上脱落，从而裸露出荧光团进而发挥成像的作用2。目前，可用于探针设计的有机荧光染料主要包括以下几种：香豆素、氟硼荧、花菁和罗丹明；而无机荧光材料主要包括量子点和一些纳米材料。 近红外荧光探针因其结构相对简单、易于合成以及功能较多的特点被广泛应用。近10年来，荧光成像技术主要集中在近红外窗口，近红外一区（NIR-I，700-900nm）荧光成像以其高灵敏度、快速反馈、无危害辐射、低成本等优点，在生物医学研究中受到广泛关注3。其常用的荧光母体主要有如下几类：花菁类、氧杂蒽类、BODIPY类等。 传统的花菁类染料具有较大的摩尔消光系数、较高的吸收截面、可控的吸收和发射波长以及较低的生物毒性等优势，被广泛应用于离子检测及肿瘤定位等研究领域中。花菁染料的优点使其成为近红外荧光探针的重点研究方向之一。 花菁类染料通常是两个含氮芳香杂环通过奇数个碳原子的聚乙炔链相连接形成的大共轭结构，其发射波长在650-900nm之间。其分子内的1，2-亚乙烯基（=CH-CH=）单元的增加或减少可实现对花菁染料吸收和发射波长的动态调整。据报道，每增加一个1，2-亚乙烯基单元，就会使得相应的花菁染料的吸收波长红移100nm4。 图花菁染料的结构一般通式 其中最具代表的分子染料是获得FDA批准临床应用的吲哚菁绿ICG，该分子的荧光发射峰在800nm左右。 吲哚箐绿（ICG）又称靛青绿或福氏绿，是一种三碳箐染料，其特点为5： 最大吸收波长805nm，最大荧光波长835nm，均在近红外光范围内； 与血浆蛋白结合率高达98%，主要与血浆中较大分子的高密度和低密度脂蛋白相结合，形成较大体积的ICG-血浆蛋白复合体，故极少从脉络膜毛细血管漏出； ICG分子为三维立体结构，其两个多环结构具有亲脂性（如亲磷脂成分），而其硫酸盐基团具有亲水性，因此ICG具有亲脂和亲水的双重特性； ICG的血浆清除有两个高峰，第1个高峰在染料注入后的3~4min，第2个高峰在1h后。 图荧光显影示意图 图ICG吸收以及激发光谱 二、荧光电子内窥镜结构组成 荧光电子内窥镜主要由摄像系统、数据处理系统、光源和显示器四部分组成。荧光内窥镜在技术特点上的难度主要体现在以下两个方面： 1）设计和制造。为实现在宽光谱范围内400-900nm矫正像差（即白光图像和荧光图像切换时不需另行调节焦距），荧光内窥镜需45-50片光学透镜并采用特殊的光学结构设计，普通白光内窥镜通常仅需30-35片光学透镜； 2）镀膜技术。由于荧光内窥镜的镜片数量远超过普通白光内窥镜，其单面反射率需控制在0.3%以内，从而实现高透过率和高对比度。白光内窥镜的单面反射率控制范围则为0.5%以内6。 图海泰新光荧光内窥镜示意图 图荧光内窥镜原理示意图