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PAGE PAGE 10 石蜡切片与冰冻切片培训教程 石蜡切片和冰冻切片优缺点比较 项目 目的及 抗原稳定性 石蜡切片定位准确 冰冻切片 定位不准，抗原易弥散， 定性快 抗原保真酶活性 操作步骤保存 切片厚度制片效果 适 用 一抗指定 冰冻切片 需修复 活性好，易出阳性结果 繁琐，耗时长 简易快捷 室温，可长期保存 -80°C 半年左右 2-5um，易得连续切片 5-10um，不易得连续切片片子漂亮，组织形态结构 抗原易阳性，冰晶易导致保存好，石蜡自发荧光有 组织结构破坏 干扰 感染性标本，骨，钙化组 临床快速诊断，原位杂织，脂肪，小组织 交，免疫荧光，某些酶的 显示如 ATP 酶，琥珀酸脱氢酶等 概述：冰冻切片是将活组织迅速冰冻、切片、染色，进行病理诊断的方法。 主要应用:（1）快速病理诊断 （2）显示组织中的脂质 （3）在组织化学上显示酶活性 （4）神经组织学的镀银和镀金染色法 （5）免疫荧光的研究 准备材料：（1）切片机刀片（2）冰冻包埋剂 （3）液氮罐 （4）液氮专用冻存管（5）组织镊（6）手术刀或组织剪 （7）培养皿 （8）生理盐水 （9）粘附载玻片 冰冻切片机仪器说明 功能键 功能键 说明 灯光开关按钮，用于冷冻箱照明。 手动除霜按钮，用于激活和终止手动除霜。 锁定按钮，锁定解锁定控制面板以避免无意修改输入的参数。要锁定或解锁定，按下约 5 秒。 用箭头所指的+和-键在钟型标记的面板上可以设 置实际时间。按下 或按钮超过1秒，时间值连续增加或减少（自动重复功能）。 功能键 说明 UVC UVC 紫外灯开关按钮，用于冷冻箱消毒，开启后 30 分钟后自动熄灭 用箭头所指的+和-键设置自动除霜循环的起始。同时，时和分标记之间的 LED 闪烁。自动除霜循环每24 小时进行一次。 用+和-键设置冷冻箱的温度。实际温度是标准读数。要显示需要的数值，触摸+和-键。用+和-键置需要的数值。按下或按钮超过1秒，冷冻盒温度值连续增加或减少。完成设置后5秒将显示实际值。 用于激活 Peltier 元件冷冻快速冷冻站。一旦激活， 制冷系统的压缩机将在 40 秒后启动以加强热传导效应。仪器无Peltier 元件显示为“LL”，有Peltier 元件显示为“PE”。 功能键 说明 粗调后退按钮，用于标本远离刀片的快速移动。 微调后退按钮，用于标本远离刀片的慢速移动。 粗调前进按钮，用于标本靠近刀片的快速移动。 微调前进按钮，用于标本靠近刀片的快速移动。 （注意：以上粗调和微调按钮均可采用点按步进移动或长按连续移动。） 冰冻切片操作流程 ①取材：手术过程中取下的新鲜组织，不能太大太厚，厚者冰冻费时，大者难以切完整，大小约为 24×24×2mm； ②设定冷冻温度：应视不同的组织选择不同的冷冻箱冷温度,冷冻不足无法切片，冷冻过度切片易碎，如：a 软骨、睾丸、脾脏等高密度组织，冷冻箱温度在 -10 ～ 15℃；b 甲状腺、脑、心脏、肌肉等组织，温度在-15～25℃；c 肝、乳腺、膀胱等含脂肪的组织，温度在-25℃以下。 ③包埋冷冻：取出组织标本盘，放平摆好组织，周边滴上包埋剂（一般为OCT），速放于冷冻台上，冰冻。小组织应先取一标本盘，滴上包埋剂让其先冷冻，再放上组织，滴上包埋剂冷冻。 ④修平组织：将冷冻好的组织块，夹紧于切片机标本头上，启动粗进退键， 转动旋钮，将组织修平。 ⑤调节防卷板与切片：制作冰冻切片，关键在于防卷板的调节上，这就要求操作者要细心，准确地将其调较好，调校至适当的位置。调好切片厚度，切片时， 切出的切片能在第一时间顺利地通过刀与防卷板间的通道，平整地躺在持刀器的铁板上。这时便可掀起防卷板，取一粘附载玻片，将其附贴上即可。 冰冻切片冷冻温度选择表 组 织 肾上腺骨 髓 脑 膀胱 乳腺-脂肪 乳腺-较少脂肪软骨 宫颈脂肪 心脏和血管小肠 肾脏喉 唇 肝脏肺 淋巴肌肉鼻 胰腺 前列腺卵巢 10-15 15-25 25-50 直肠 直肠 皮肤带有脂肪 皮肤不带有脂肪脾脏或血性组织睾丸 甲状腺舌 刮宫物 冰冻切片常见问题、原因、解决方法 常见问题 切片拖尾现象 原因 标本不够冷 刀片或防卷板不够冷 解决方法 设置较低的温度 等到刀片或防卷板达到冷冻箱温度 切片褶皱 切片卷曲在防卷板上 切片撕裂 切片没有适当铺平 标本盘不能拆卸 -刀片刃缘损坏 -使用刀片的不同部位或更换新刀片 -防卷板