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(三)比吸光系数比较法 比吸光系数比较法是利用标准的 值 进行定量测定的。 方法:将样品的比吸光系数与标准物质 的比吸光系数比较,计算出样品的含量。 可见分光光度法 可见分光光度法和 紫外分光光度法 分光光度法(visible spectrophotometry) 可见分光光度法和紫外分光光度法 根据物质的吸收光谱及光的吸收定律, 对物质进行定性和定量分析的分析方法 可见光 紫外 紫 蓝 青 绿 黄 橙 红外 400 450 480 500 560 600 650 760 800nm 红 可见分光光度法:380nm~780nm 紫外分光光度法:200nm~380nm 红外分光光度法:780nm~300000nm 第一节 物质的吸收光谱 一、物质对光谱的选择性吸收 可见分光光度法和紫外分光光度法 光照射某物质,物质能够吸收光,使原有的基态转为激发态,只有当分子的能量(h?)与被照射物质粒子的基态和激发态能量之差(?E)相等时才能被吸收。 M(基态)+ h? ??M*(激发态) 可见分光光度法和紫外分光光度法 ▲单色光:具有同一波长的光 ▲复合光:由不同波长光组成的光 白光(日光、白炽灯光等):由不同颜色的 光按一定强度比例混合而成 ■光的性质和物质的颜色 光由光量子组成,其能量与λ波长成反比 E = hr = hc λ 红 橙 黄 绿 青 青蓝 蓝 紫 ◆对角上的颜色 称为互补色 ◆物质的颜色与 吸收光颜色为 互补色 ■物质颜色与吸收光颜色的关系 可见分光光度法和紫外分光光度法 物质对光的吸收具有选择性,若溶液选择性地 吸收了某种颜色的光,则溶液呈吸收光的互补光。 可见分光光度法和紫外分光光度法 ▲溶液呈吸收光的互补色光的颜色 透过光的颜色 第一节 物质的吸收光谱 一、物质对光谱的选择性吸收 二、物质的吸收光谱 例如: KMnO4呈红色,吸收了绿色的光 可见分光光度法和紫外分光光度法 吸收光谱(A-λ曲线) ( absorption spectrum) 图13-2 不同波长KMnO4溶液吸收光谱 ▲ 当浓度改变时 λmax位置不变 峰的高度A成比例增加 0.2 0.4 0.6 0.8 Ⅰ Ⅱ Ⅲ 400 450 500 550 600 650 Ⅰ 20mg/L Ⅱ 40mg/L Ⅲ 60mg/L nm A λ λmax=520nm 溶液浓度c成比例增加 A:称吸光度 λ相同时: 可见分光光度法和紫外分光光度法 第一节 物质的吸收光谱 一、物质对光谱的选择性吸收 二、物质的吸收光谱 选择λmax的单色光,目的是使测定峰高值 最大(灵敏度最大),减小测量误差。 第三节 可见分光光度计 主要部件 1.光源:钨丝灯(λ360~2500nm) 稳定,足够光强度 2.单色器:获取单色光(滤光片;棱镜或光栅) 3.吸收池(样品池或比色皿):石英,玻璃 4、检测器: 光电池、光电管 5、指示器:指针式微安表 可见分光光度法和紫外分光光度法 第三节 可见分光光度计 可见分光光度法和紫外分光光度法 图 721分光光度计光学系统示意图 光源 聚光镜 反射镜 吸收池 光电管 狭缝 准直镜 棱镜 可见分光光度法和紫外分光光度法 图 混合光在棱镜中的色散 600 600 600 白光→棱镜(或光栅) 连续光谱 转动棱镜或光栅 狭缝处获单色光(λ) 检测器(detector) 将光强度信号 可测电信号 光电池: 在一定条件下,光电流与照射光强度成正比 硒光电池结构示意图 入 射 光 + 铁片 半导体硒片 金属薄膜 e 可见分光光度法和紫外分光光度法 5、指示器 吸光度与百分透光度标度 2.0 1.0 0.7 0.6 0.5 0.4 0.3 0.2 0.15 0.1 0.05 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 A T(%) 721型分光光度计采用指针式的微安表 可见分光光度法和紫外分光光度法 现分光光度计采用数字显示,直接读取A值。 但先用参比溶液(空白溶液)调节T值为100%值。 一、透光率和吸光度 光的吸收示意图 dx b 入射光强度:I0 吸收光强度:Ia 透过光强度:It 反射光强度:Ir 第二节 分光光度法的基本原理 实际测量中常用参比消除反射光的影响,即有: I0= Ia+ It I0= Ia+ It+ Ir dx b 透光率的负对数称为吸光度,用符号A表示。A愈大,溶液对光的吸收愈多
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