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大肠菌群的测定方法操作规程 1 培养基和试剂 月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤，煌绿乳糖胆盐肉汤，结晶紫中性红胆盐琼脂，无菌 生理盐水 2 操作步骤 2.1样品的稀释：以无菌吸管吸取 25 mL 样品置盛有 225 mL 生理盐水的无菌锥 形瓶 （瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制成 1:10 的样品匀液。 用 1 mL 无菌吸管吸取 1:10 样品匀液 1 mL ，沿管壁缓缓注入 9 mL 生理盐水 的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管或换用 1 支 1 mL 无菌吸管反复吹打，使其混合均匀，制成 1:100 的样品匀液。 根据对样 品污染状况的估计，按上述操作，依次制成十倍递增系列稀释样品匀液。每递增 稀释 1 次，换用 1 支 1 mL 无菌吸管或吸头。从制备样品匀液至样品接种完毕， 全过程不得超过 15 min。 2.2选取 2 个～3 个适宜的连续稀释度, 每个稀释度接种 2 个无菌平皿，每皿 1 mL 。同时取 1 mL 生理盐水加入无菌平皿作空白对照。 2.3及时将 15 mL ～20 mL 冷至 46℃的结晶紫中性红胆盐琼脂（VRBA ）约倾注 于每个平皿中。小心旋转平皿，将培养基与样液充分混匀，待琼脂凝固后，