药物分离纯化技术制备色谱分离技术详解演示文稿.pptVIP

离子交换树脂的一般原则---- 选择取决于被分离物质的电荷性质； 强的使用范围宽，弱的分离生物大分子时，活性不容易失去； 反离子，为了提高交换容量，选择结合力小的反离子； 亲疏水性选择，一般分离大分子时，选择疏水性的基质，活性易保持； 制备色谱技术 * 当前30页，总共48页。 常规柱色谱的操作 (1)装柱：干法和湿法； (2)上样：液体上样和拌样上样，样品带尽可能窄； (3)洗脱：始终保持洗脱剂液面高于柱床表面，可梯度洗脱； (4)流分收集：常采用固定体积收集法，结合TLC检验； (5)样品回收：减压蒸馏或重结晶 制备色谱技术 * 当前31页，总共48页。 干柱柱色谱 干吸附剂，待分离样品配成浓溶液或吸附于少量填料上上样，洗脱液接近色谱柱底部时停止洗脱，挖出或切开色带。 制备色谱技术 时间短 节省试剂 玻璃柱 尼龙柱 * 当前32页，总共48页。 减压柱色谱 减压促进溶剂流动。 制备色谱技术 * 当前33页，总共48页。 与加压相比，变换溶剂更加方便； 吸附剂高度一般不超过5cm； 分离过程中，逐渐增加洗脱剂中高极性溶剂的比例，开始阶段增加幅度较小(1%,2%,3%)，随后幅度逐步增大(5%,10%,20%等)，通常收集20-25个流分即可将所有成分洗脱。 制备色谱技术 * 当前34页，总共48页。 药物分离纯化技术制备色谱分离技术详解演示文稿 * 当前1页，总共48页。 （优选）药物分离纯化技术制备色谱分离技术 * 当前2页，总共48页。 制备色谱技术 常规制备薄层色谱PTLC 薄层板制备 为了增大上样量，增加了吸附剂用量。 固定相：硅胶、氧化铝、纤维素、C2、C18等反相健合硅胶 支撑：玻璃板或铝箔 平均25?m, 5~40 ?m 硅胶H、硅胶G、硅胶F254、硅胶F365、硅胶P * 当前3页，总共48页。 制备色谱技术 硅胶粒径范围影响： 越细越均匀，分离度越高，但？ 粒径范围宽，分离效率低，怎么办？ ------薄层厚度的渐变 薄层厚度从底部到前沿逐渐增加，这样展开剂的速度逐渐变慢，样品谱带在展开过程中逐步富集，可保持较窄的谱带。 * 当前4页，总共48页。 制备色谱技术 薄层板的制作方法： 常采用湿法：平铺法和涂铺法。 混合 平铺 涂铺器 自然干燥一夜 105-120℃活化 黏合剂 硅胶 煅石膏 或羧甲基纤维素钠水溶液 * 当前5页，总共48页。 制备色谱技术 薄层色谱条件选择 操作参数 流速 展开模式 分离距离 样品量 流动相 选择性 溶剂强度 黏度 展开缸类型 薄层板和展开缸空腔体积比值 温度 蒸气相 固定相 薄层厚度 颗粒大小 质量 开放型 操作不连续 * 当前6页，总共48页。 常用溶剂 (1)电子接受体溶剂：苯、甲苯、乙酸乙酯、丙酮等； (2)质子给体溶剂：异丙醇、正丁醇、甲醇、无水乙醇等； (3)强质子给体溶剂：氯仿、冰醋酸、甲酸、水等； (4)质子受体溶剂：三乙胺、乙醚等； (5)偶极作用溶剂：二氯甲烷 (6)惰性溶剂：环己烷、正己烷等。 制备色谱技术 * 当前7页，总共48页。 制备色谱技术 上样和展开 先用甲醇展开一次，除去可能存在的杂质； 低挥发性溶剂溶解样品会引起样品带变宽，因此选用挥发性溶剂（己烷、二氯甲烷、乙酸乙酯等），且溶剂极性尽可能小。 样品浓度以能均匀分布于吸附剂表面不析出为宜，5-10%； 带状点样，尽可能窄；如点样带太宽，可用高极性溶剂展开至点样带上方2cm处进行浓缩，然后将铺板干燥后再用展开剂展开。？ * 当前8页，总共48页。 制备色谱技术 样品检测 有色物质直接观察斑点； 荧光物质在紫外灯下观察； 无色无荧光可在荧光板分离，紫外光下显示暗斑； 喷显色剂，结构稳定且不易氧化物质可以用碘蒸气显色，可逆； * 当前9页，总共48页。 制备色谱技术 常用显色剂： 硫酸：硫酸:乙醇(1:1)溶液，喷后110℃烤5分钟，不同有机物显不同的颜色； 0.05%高锰酸钾溶液，还原性物质显黄色，背景淡红色； 酸性重铬酸钾：5%重铬酸钾浓硫酸溶液，必要时150℃烤薄层； 5%磷钼酸乙醇溶液：喷后120℃烤，还原性物质显蓝色，再用氨气熏，背景无色。 * 当前10页，总共48页。 制备色谱技术 样品收集： 切割：刮刀或与真空相连的管型刮离器； 回收：极性尽可能低的溶剂洗脱，通常1g吸附剂用5mL溶剂，丙酮和氯仿常用，甲醇因溶解硅胶及其中含有的杂质不常用。 4型玻璃沙芯漏斗过滤洗脱液，再用?m滤膜过滤。 硅胶的黏合剂以及荧光指示剂等杂质，可用Sephadex LH-20过滤纯化。 * 当前11页，总共48页。 制备色谱技术 常规制备TLC速度慢，效率低，如何提高？ 加压 离心 * 当前12页，总共4