克隆文库的构建及其在微生物分子生态学中的应用.ppt

克隆文库的构建及其在微生物分子生态学中的应用;;;1.1基因组文库; 理论文库克隆子数 = ;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;中含有带lacz的质粒后，质粒lacz基因编码的α肽链和菌株基因组表达的N端缺陷的β-半乳糖苷酶突变体互补，具有与完整β-半乳糖苷酶相同的作用，在诱导剂IPTG的作用下可以使X-gal生成蓝色物质的能力，这种现象即α-互补。当外源DNA（即目的片段）与含lacz的载体连接时，会插入进MCS（即靶基因），使α肽链读码框破坏，这种重组质粒不再表达α肽链，将它导入宿主缺陷菌株则无α互补作用，不产生活性β-半乳糖苷酶，即不可分解培养基中的X-gal产生蓝色，培养表型即呈现白色菌落。 ;; 最常用、最可靠的方法之一。可大规模地分析文库的克隆子。核酸杂交的主要步骤是核酸分子的变性和选择性退火。双链DNA或处于二级结构的RNA分子被变性回复到它们原来单链、线性的形式，从而使它们处于能与互补的核苷酸链退火杂交的状态。双链DNA采用碱(如NaOH)或高温处理变性，RNA分子则通常是在甲酰胺存在的情况下通过加热使之变性。互补的核苷酸链通常是外部加入的与母板RNA序列互补的DNA链与母板DNA互补的DNA或RNA链。外部加入的互补链若事先被标记，则可以作为探针从核酸混合物中检测到与之杂交的特定的目标核酸序列。而且由于氢键的微弱性，互补的单链核苷酸分子经退火而形成核酸双链分子的过程是可逆的。 ;;;;;;;;;;;;;克隆文库的构建及其在微生物分子生态学中的应用;;;1.1基因组文库; 理论文库克隆子数 = ;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;中含有带lacz的质粒后，质粒lacz基因编码的α肽链和菌株基因组表达的N端缺陷的β-半乳糖苷酶突变体互补，具有与完整β-半乳糖苷酶相同的作用，在诱导剂IPTG的作用下可以使X-gal生成蓝色物质的能力，这种现象即α-互补。当外源DNA（即目的片段）与含lacz的载体连接时，会插入进MCS（即靶基因），使α肽链读码框破坏，这种重组质粒不再表达α肽链，将它导入宿主缺陷菌株则无α互补作用，不产生活性β-半乳糖苷酶，即不可分解培养基中的X-gal产生蓝色，培养表型即呈现白色菌落。 ;; 最常用、最可靠的方法之一。可大规模地分析文库的克隆子。核酸杂交的主要步骤是核酸分子的变性和选择性退火。双链DNA或处于二级结构的RNA分子被变性回复到它们原来单链、线性的形式，从而使它们处于能与互补的核苷酸链退火杂交的状态。双链DNA采用碱(如NaOH)或高温处理变性，RNA分子则通常是在甲酰胺存在的情况下通过加热使之变性。互补的核苷酸链通常是外部加入的与母板RNA序列互补的DNA链与母板DNA互补的DNA或RNA链。外部加入的互补链若事先被标记，则可以作为探针从核酸混合物中检测到与之杂交的特定的目标核酸序列。而且由于氢键的微弱性，互补的单链核苷酸分子经退火而形成核酸双链分子的过程是可逆的。 ;;;;;;;;;;;;;