基因表达调控常用分子生物学技术专家讲座.pptxVIP

蛋白质生物合成（翻译）;第一节蛋白质生物合成体系;基本原料：20种编码氨基酸 模板：mRNA 适配器：tRNA 装配机：核蛋白体 主要酶和蛋白质因子：氨基酰-tRNA合成酶、转肽酶、起始因子、延长因子、释放因子等 能源物质：ATP、GTP 无机离子：Mg2+、 K+;原核生物多顺反子;遗传密码;遗传密码特点;二、核糖体是蛋白质生物合成场所;三、tRNA是氨基酸运载工具及蛋白质生物合成适配器;四、蛋白质生物合成需要酶类、蛋白质因子等;（二）蛋白质因子;蛋白质生物合成能源物质为ATP和GTP; 参加蛋白质生物合成无机离子有Mg2+、K+ 等。;第二节氨基酸活化;氨基酸与特异tRNA结合形成氨基酰-tRNA过程称为氨基酸活化。 参加氨基酸活化酶：氨基酰-tRNA合成酶,有高度特异性。;二、肽链合成起始需要特殊氨基酰-tRNA;第三节肽链生物合成过程;起始(initiation) 延长(elongation) 终止(termination );（一）起始;IF-3;原核mRNA在小亚基上准确定位和机制：;指在mRNA模板指导下，氨基酸依次进入核蛋白体并聚合成多肽链过程；肽链延长在核蛋白体上连续循环式进行，又称为核蛋白体循环，包含以下三步：;1. 进位;2.成肽;成肽反应过程;3. 转位;基因表达调控常用分子生物学技术;（三）终止;RF-3可结合核蛋白体其它部位，有GTP酶活性，能介导RF-1、RF-2与核蛋白体相互作用。 ;原核肽链合成终止过程 ; 多聚核蛋白体形成能够使蛋白质生物合成以高速度、高效率进行。;多聚核蛋白体;第四节蛋白质翻译后修饰和折叠;1. 分子伴侣:;第13章;第一节基因表示调控基本概念;一、基因表示是指基因转录及翻译过程;二、基因表示含有时间特异性和空间特异性;（二）空间特异性;三、基因表示方式及调整存在很大差异;（一）基本（或组成性）表示;（二）有些基因表示受到环境改变诱导和阻遏;四、基因表示调控展现多层次和复杂性;第二节原核基因表示调控;——调整主要步骤在转录起始。;（二）操纵子模型普遍性;原核生物;是RNA聚合酶结合并开启转录特异DNA序列。;（三）原核操纵子受到阻遏蛋白负性调整;二、操纵子调控模式在原核基因转录起始调整中含有普遍性;;;+ + + + 转录;单纯乳糖存在时，细菌利???乳糖作碳源；若有葡萄糖或葡萄糖/乳糖共同存在时，细菌首先利用葡萄糖。葡萄糖对 lac 操纵子阻遏作用称分解代谢阻遏。 ;惯用分子生物学技术原理及应用;第一节;核酸分子杂交 (nucleic acid hybridization) 在DNA复性过程中，假如把不一样DNA单链分子放在同一溶液中，或把DNA与RNA放在一起，只要在DNA或RNA单链分子之间有一定碱基配对关系，就能够在不一样分子之间形成杂化双链(heteroduplex) 。;;（一）印迹技术;用放射性核素、生物素或荧光染料标识其末端或全链已知序列多聚核苷酸链被称为“探针”，探针能够与固定在NC膜上核苷酸结合，判断是否有同源核酸分子存在。 ;二、印迹技术类别及应用;三种印迹技术比较;分子杂交试验;放射自显影照片;第二节;5?;Cycle 3;模板DNA 特异性引物 耐热DNA聚合酶 dNTPs Mg2+; PCR基本反应步骤;二、PCR技术主要用途;第五节;是指将许多特定DNA片段有规律地紧密排列固定于单位面积支持物上，然后与待测荧光标识样品进行杂交，杂交后用荧光检测系统等对芯片进行扫描，经过计算机系统对每一位点荧光信号做出检测、比较和分析，从而快速得出定性和定量结果。该技术亦被称作DNA微阵列(DNA microarray)。 ;基因芯片工作流程示意图;是将高度密集排列蛋白分子作为探针点阵固定在固相支持物上，当与待测蛋白样品反应时，可捕捉样品中靶蛋白，再经检测系统对靶蛋白进行定性和定量分析一个技术。;转基因技术;转基因技术 采取基因转移技术使目标基因整合入动物或植物细胞中，使之发育成个体。 ;基因表达调控常用分子生物学技术;崔永元;基因表达调控常用分子生物学技术;基因表达调控常用分子生物学技术;基因表达调控常用分子生物学技术;基因表达调控常用分子生物学技术;核转移技术 即动物整体克隆技术，将动物一个体细胞核全部导入另一个体去胞核激活卵细胞内，使之发育成个体，即克隆(clone)。;多莉羊诞生过程;基因剔除技术(gene knock out) 也称基因靶向(gene targeting)灭活，有目标去除动物体内某种基因技术。;将灭活基因放入胚胎干细胞(embryonic stem cell，ES)中，使这一灭活基因经过同源重组取代原有目标基因，筛选到基因已定点灭活细胞后，经过显微注射将细胞注入小鼠囊胚中