色谱分析第五章.pptx

色谱分析第五章;1、 进样装置;2 梯度淋洗装置;一 色谱系统; 二 色谱填充柱; 二 色谱填充柱; 二 色谱填充柱; 二 色谱填充柱; 三 液相色谱分离原理;10; 液固色谱分离原理与色谱固定相;液固色谱固定相得吸附剂有极性和两类、 非极性吸附剂主要就是活性碳,因机械性能差,已很少使用、 极性吸附剂有硅胶、聚酰胺、氧化铝、氧化镁和分子筛, 常用得就是硅胶和氧化铝, 特别就是硅胶用得最多 硅胶得硅羟基结构; 液液色谱和键合色谱;⑴化学键合相得合成 ① 酯化反应和酰卤氨解反应 ≡Si—OH ＋ HOR ─→ ≡Si—OR ≡Si—OH ＋SOCl2 ─→ ≡Si—Cl ＋NH2R ─→ ≡Si-NHR2 ② 硅胶与有机卤硅烷反应或格氏试剂或有机锂化物反应 ≡Si—OH ＋ Cl-Si-R2(或R-Si-R2) ─→ ≡Si-O-Si-R2 ;⑵正相键合固定相 ①弱极性 正相弱极性键合固定相得官能团有二醇、醚基、三烷胺和硝基等, 结构为: OH OH │ │ 二醇: －(CH2)3 OCH2CHCH2) 醚基: －(CH2)3 OCH2CHCH2 三烷胺: －(CH2)3 N(CH3)2 ;②中等极性 键合得官能团有氰基等, 相也可以用于反相色谱操作、 其结构为: 氰基: －(CH2)n CN n=2或3 ③强极性 键合得官能团有烷氨基、氨基和二氨基等, 其结构为: 氨基: －(CH2)n NH2 n=3或4 二氨基: －(CH2 )3 NH(CH2) 2NH2 ;⑶反相键合固定相 反相键合固定相所键合得烷基可以就是长碳链, 也可以就是短碳链、 有甲基硅烷、己基硅烷、辛基硅烷、十六硅烷、十八硅烷、二十二硅烷等、 其中以十八硅烷 (简称ODS或C18) 和辛硅烷(C8)、丁基(C4)等 影响键合固定相在色谱分离过程得行为 ①硅胶表面表面覆盖度、表面键合相浓度 ②键合基团得链长(链越长极性越弱) ③载体得性质以及温度等因素 在选择固定相时,除了按照键合相性质选择之外还要考虑被分离组分分子得大小选取恰当孔径大小得固定相载体。;⑷反相键合色谱操作;④流动相中有机溶剂得比例 由于以硅胶为载体得化学键合相填料有疏水性, 表面张力大得水不易渗入到固定相得空隙之中, 而且, 组分在疏水性表面与水溶液之间得传质和平衡过程慢柱效降低, 从而造成色谱带展宽、 为减小这种效应, 一般流动相中有??溶剂得比例不宜过小, 以保证柱效和峰形、 ;⑤流动相得离子强度 必要时可以在流动相中加入盐类物质, 溶液离子强度增加, 减轻了组分分子通过离子交换得途径与残留硅醇基得相互作用, 减少拖尾、 对复盖量小得键合相更为有效 、所用得盐类可以就是无机盐(例如,碳酸铵等), 也可以就是有机胺(四烷基铵盐,如四甲基硝酸铵等)或各种有机阴离子、 加入得盐得浓度约为千分之几、 ;;;一 色谱系统; 离子交换色谱 1、 原理和分离对象 阴离子交换 ～R+Y－＋X－ ＝ ～R+X－＋Y－ 阳离子交换 ～R－Y+＋X+ ＝ ～R－X+＋Y+ ; 离子交换色谱首先就是用于离子化合物得分离(如盐类),但现在更多得就是用于有机碱(B)和有机酸(HA)得分离、 这就是利用有机酸(碱)存在以下平衡, 因而可以用离子交换色谱来分离: HA ＝ H+ ＋A－ B＋H+ ＝ HB+ 糖类在水溶液中不会以离子方式存在、 通过下面反应, 形成硼酸盐得配合物, 也可以用离子交换色谱来分离: 糖＋BO3 2 - ＝ 糖BO3 2 - ;2、 固定相, 离子交换剂 (1)离子交换剂 (强酸型包括:磷酸纤维素(P)、甲基磺酸纤维素(SM)、乙基磺酸纤维素(SE) 弱酸型包括:羧甲基纤维素(CM)等 ) (2)离子交换剂 (强碱型包括:三乙基氨基乙基纤维素(TEAE)、 弱碱型包括:二乙基氨基乙基纤维素(DEAE)、氨基乙基纤维素(AE);3、 流动相得影响 ①pH值得影响 弱酸和弱碱组分在流动相中得分布系数取决于流动相pH值 例如样品组分就是碱、pH值一定,流动相中有以下平衡: B ＋ H+ ＝ HB+ HB+ 与交换剂之间又存在以下平衡: HB+ ＋R －Y+ ＝ R－HB+ ＋Y+