分子生物学第五章1-PPT幻灯片.pptVIP

转录（transcription）是以DNA为模板，在依赖DNA的RNA聚合酶的催化下，以4种rNTP（ ATP、CTP、GTP和UTP ）为原料，合成RNA的过程。转录是DNA将遗传信息传递给蛋白质的中心环节。 在有些RNA病毒中，RNA也可以指导RNA的合成。;基因转录：DNA mRNA;1957年 Crick提出了中心法测(central dogma) DNA → RNA→ 蛋白质 1970 Crick又作了部分修改： DNA RNA 蛋白质;转录起始于RNA聚合酶和启动子(promoter)结合之后，转录起始的第一个碱基称为转录起始点(start point) 。在RNA聚合酶的作用下合成RNA，至终止子(terminator)终止。 由启动子到终止子之间的序列称为转录单位(transcription unit)。转录起始点前面的序列称为上游(upstream)，后面的序列称为下游(downstream)。;A transcription unit is a sequence of DNA transcribed into a single RNA ，starting at the promoter and ending at the terminator; RNA合成和DNA复制的区别;第一节 转录酶和转录因子;RNA pol和DNA pol有2点不同： （1）RNA pol没有任何校对功能； （2）能起始新的RNA链。;一、原核生物的RNA聚合酶 大部分原核生物的RNA聚合酶的结构十分相似，在聚合酶的表面形成一条约2.5nm的通道，是容纳DNA分子的场所。 细菌RNA聚合酶的大小约为9.5 nm ?9.5 nm ? 16 nm。;;;;;;;;;;1. 大肠杆菌RNA聚合酶 大肠杆菌RNA聚合酶由多亚基组成，全酶组装过程为?2+? +?’+? ，分子量为480 KDa左右。?亚基与全酶结合疏松，很容易与全酶分离。 全酶可以起始RNA的合成，之后?亚基从全酶解离下来。;;;;;;;Bacterial RNA polymerase have four types of subunit; α, β, and β’ have rather constant sizes in different bacterial species, but σ varies more widely. ;?亚基可能参与全酶的组装及全酶识别启动子。另外， ?亚基还参与RNA聚合酶与一些转录调控因子间的作用。 ?亚基具有与底物（NTP及新生的RNA链）结合的能力。利福霉素可以阻断转录的起始，链霉溶菌素可抑制延伸反应，二者均是通过与?亚基的结合而发挥作用的。;?’亚基可能与模板结合。 肝素可与?’亚基结合而抑制转录，并且可以和?’亚基竞争DNA的结合位点。 ?亚基和?’亚基提供了RNA聚合酶的活性中心，其一级结构与真核生物RNA聚合酶大亚基有同源性。 ?亚基的功能是帮助全酶识别启动子并与之结合。 ?亚基也可被看作一种辅助因子，因此又可称为?因子（ Sigma factor）。;在转录过程中，RNA聚合酶需要与其他蛋白质辅助因子（转录因子）共同作用，才能保证转录的顺利进行。如转录终止时的终止因子和抗终止因子。 大肠杆菌RNA聚合酶多亚基的复杂结构主要是为酶提供了与多种因子相互作用的能力，从而可以识别多种启动子。;2. ?因子 RNA聚合酶要负责所有基因的转录，也就是说要识别所有转录单位的启动子。因此， ?因子在RNA聚合酶识别启动子的过程中起关键作用。 ?因子的二级结构属于?螺旋，是通过识别启动子上的某一序列来控制RNA聚合酶与启动子的结合的。;A map of the E. coli σ70 factor identifies conserved regions. Regions 2.1 and 2.2 contact core polymerase, 2.3 is required for melting, and 2.4 and 4.2 contact the -10 and -35 promotor elements. The N-terminal region prevents 2.4 and 4.2 from binding to DNA in the absence of core enzyme. ;;;Amino acids in the 2.4 α- helix of σ70 contact specific bases in the non-template stran