血涂片及骨髓涂片的制片与读片.docx

血涂片及骨髓涂片得制作与读片 III 潘志强2006—3—30实验准备 一 ?器材： 载玻片:每只动物一块 盖玻片:每只动物一块 滴管：4个 橡皮吸头:4个 中号機子:4把 大WJJ 4把 眼科镣：4把 玻璃棒：4根 烧杯：1 000 ml,2个 量筒:100mL 500 ml、1000 ml 各一 蜡笔 棕色小口瓶 碾钵 载玻片处理一般将我玻片先用洗衣粉水溶液煮沸20分钟，用流水冲洗，再经清洁液浸泡 过夜，用流水反复冲洗,最后入9 5 %酒精浸泡约1小时。取岀，以洁净布巾夹持玻片边缘擦干备 用。 二、试剂： 瑞氏染液240ml 瑞氏染料粉剤 0、lg 纯甲醇(AR) 60ml 将粉剤放入洁净干燥碾钵内，先加少量甲醇研磨使染料溶解，然后将己溶解得染料倒入洁净 得棕色玻璃瓶内,剰下未溶解得再加入少暈甲醇研磨，如此反复，肖至染料完全溶解为止、新配制 得染液需密封保存，室温放置1周后才能使用。染料存放越久，染色效果越好。 磷酸盐缓冲液 1%KH,PO4 3 0 ml 1%而瑯0七_ _ ——20ml 加蒸偏水至§0 0爲1，商而蓟6 : 5?7。0,定容至100 0 ml. 甲醇 鸡蛋清:蒸馄水与鸡蛋清按1/1得比例稀释。 中性树胶:如果中性树胶过于粘稠，可将中性树胶与二甲苯按7/3得比例稀释. 二甲苯 ?实验步骤 一、涂片 (二)血液涂片得制作 ⑴需载玻片2张,分别称为玻片1与玻片2(推片)。 用玻片1 一端接约3 mm直径得血滴，将此玻片1保持水平。 ⑶取另-?边缘平整得载玻片2(推片)，将其前端放在血滴前,灼片1保持30°角并稍向后移与血 滴接触，即见血液沿片2(推片)下缘放开，使血液展开并充满整个推片得宽度. 立刻将推片与载玻片呈3 0 °角，边轻压推片边将血液按下图得箭头方向推动涂抹,至血液 铺完血膜为止、 挥动片1使血膜吹干，用蜡笔将血膜边缘圈剛备染色。 每只动物涂片一张。 —张良好得血片,要求厚薄适宜，头、体、尾分明、 置3 0 inm-lhr后较利于观察红细胞得形态。 注意事项: 如标本本身太短，可观察得部分会受肝限■故以在离开栽玻片另一端2 cm地方涂抹为宜。 戟玻片、推片得角度越小、虹液越薄:涂抹速度越慢、也越薄。在涂抹贫血病人得血液时.将推片柏竖起(不就 是30°而就是3 5°?40°左右).以较快得速度推比较好?而对红细胞増髙得病人则相反. 如用力过耘白细胞容易破损。 (二)骨傑涂片得制作 用手术射刀啓掉大腿部得肌肉,充分暴露股骨，再用大剪刀从上端剪断第2股骨，用中号镶子 夹股骨以挤出骨髓.如果骨髓不易取出?可用直头眼科蹑插入骨髓腔挑出骨髓，置骨髓于一载玻 片上,由于骨髓液得纤维蛋白原含量较高，易于凝固，可先在骨髄液内加5~ 1 0倍得稀择后為蛋清, 充分混匀，取1滴至另一载玻片上,涂片。涂片方法同血液涂片，但推片要快并迅速使之干燥，每 只动物涂片一张- 二?染色 二)血液涂片得染色 将待染涂片平放于染色架上。 用滴管将染液滴于涂片上,覆盖整张涂片，放置1?3分钟。 (3 )加入等量得磷酸缓冲液或蒸憎水，与染液混匀，可以用滴管从一端吸入，另一端放出，混匀为止， 或用嘴来回轻轻吹之，使之混匀，室温下染色550分钟(白细胞数多或骨髓标本时间应长 一些，如 2 0 ?30m i n)o (4 )染色结束时，先用蒸僞水或缓冲液洗将涂片上得染液直接冲掉。 (5 )再将片子用自来水温与冲洗，至血液膜呈淡红色、 甩干或晾干玻片、 封片. (二)骨體涂片得染色 同血液涂片。 附1：【染色原理】 lo瑞氏染料 就是由酸性染料伊红与碱性染料美蓝组成得复合染料。美蓝(乂名亚甲蓝mehyleme blue)为四甲 基硫革染料,通常为氯盐，即氯化美蓝。伊红(乂名曙红eosin)通常为钠盐即伊红化钠。美蓝与伊红水溶 液混合后产生一种憎液性胶体伊红化美蓝中性沉淀，即瑞氏染料。瑞氏染料溶了,甲醇后重新解离为带正 电得芙蓝与带负电得伊红离子。 2、细胞得染色 既有物理性徊吸附作用又有化学徂亲与作用，各种细胞与细胞得各种成分化学性质不同对各种染 料得亲与力也不一样，因此用染色液染色后在同一血片上可以瞧见不同得色彩? 例如: 血红蛋日嗜酸性颗粒为碱性蛋白，与酸性染料伊红结合染成粉红色称为一酸性物质。 细胞核蛋闩勺淋巳细胞浆为酸性，勺碱性染料美蓝或天青结合,染蓝色或紫色称为-一就性物质， 中性颗粒成等电状态与伊红与美蓝均可结合,染紫红色称为?一中性物质。 3.PH对细胞染色得影响 细胞各种成分均由蛋白质构成，由于蛋白质系两性电解质，所带电荷随溶液PH而定,在偏酸性环境 中正电荷増多易与伊红结合染色偏红;在偏碱性环境中负电荷増多，易与美蓝或天青结合，染色偏蓝，因 此细胞染色对氢离子浓度十分敏感，在染色过程中玻片必须清洁，配制瑞氏染液必须用优质甲