琼脂糖凝胶电泳原理.docxVIP

琼脂糖凝胶电泳原理 使用琼脂糖作为支持介质的电泳方法。分析原理与其他支持电泳法之间的主要区别在于，它具有“分子筛”和“电泳”的双重功能。琼脂糖凝胶具有网络结构，物质分子通过时会受到阻力，而大分子物质在喘振时会受到大阻力，因此在凝胶电泳中，带电粒子的分离不仅取决于性质和数量净电荷的多少，还取决于分子的大小，从而大大提高了分辨率。 然而，由于其相对较大的孔径，分子筛作用对于大多数蛋白质而言可以忽略不计，并且现在已广泛用于核酸研究中。蛋白质和核酸根据不同的pH值将具有不同的电荷，并且电场中的力将不同，因此运行速度也不同。 根据此原理，可以将它们分开。电泳缓冲液的pH在6和9之间，离子强度在0.02和0.05之间。1％琼脂糖通常用作电泳的载体。琼脂糖凝胶可以区分大约100 bp的DNA片段。尽管其分辨率低于聚丙烯酰胺凝胶的分辨率，但它易于制备且分离范围广。普通的琼脂糖凝胶可以分离0.2-20 kb的DNA。使用脉冲电泳，可以分离高达107 bp的DNA片段。 在琼脂糖凝胶中游泳时，DNA分子具有电荷作用和分子筛作用。DNA分子在等电点以上的pH溶液中带负电荷，并在电场中向正极移动。由于糖-磷酸主链的重复结构，相同量的双链DNA几乎具有相同量的净电荷，因此它们可以相同的速率移向正极。