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临床常见苛养菌的培养与鉴定 目录1.肺炎链球菌2.流感嗜血杆菌3. 脑膜炎奈瑟氏菌4. 淋病奈瑟氏菌5.布鲁氏菌属6.放线菌属7.星形诺卡菌苛养菌8.溶血隐秘杆菌第二页，共61页。2 1.肺炎链球菌 1.1 概述 1.2 生物学性状 1.3 检测方法 1.4 药敏分析 1.5 案例分析第三页，共61页。3 1.1 肺炎链球菌-概述第4页肺炎链球菌社区感染常见病原菌之一，定植在正常人的鼻咽部。以肺部感染为主，大叶性肺炎多见。同时会导致耳部与鼻咽部的感染。严重时可继发胸膜炎、脓胸、脑膜炎和败血症。常见送检标本类型有痰、咽拭子、尿液、脑脊液、血液、穿刺液 。肺炎球菌离开人体后很易死亡，痰培养分离率很低。易感人群：小于5岁与大于65岁肺炎链球菌疫苗第四页，共61页。4 1.2 肺炎链球菌-生物学性状培养条件：CO2环境，哥伦比亚血平板。菌落形态：18-24h后血平板上形成草绿色溶血、灰色、半透明、圆形、针尖样、表面光滑（有些菌株可表现为粘液状）的菌落;培养48h后，脐凹状菌落。涂片染色：G+球菌,矛头状 ,成双或链状排列，尖端向外。用放大镜观察第五页，共61页。5 1.2 肺炎链球菌-生物学性状荚膜是肺炎链球菌的主要毒力因子之一。根据荚膜特异性多糖抗原性，分为近90个血清型，成人致病以1--9型与12型最多，其中3型毒力最强，常致严重肺炎。肺炎链球菌感染后，机体可建立较牢固的型特异性免疫，同型病菌的再次感染少见。第6页第六页，共61页。6 1.3 肺炎链球菌-检测方法OPOptochin试验: 敏感胆汁溶菌试验: 阳性菊糖发酵试验: 阳性荚膜肿胀试验：阳性触酶 ：阴性胆汁七叶甘 ：阴性甲型溶血链球菌(R)肺炎链球菌(S)第7页传统手工法1 干扰肺炎链球菌叶酸的合成抑菌环直径≥14mm为敏感抑菌环直径≥18mm 确认Optochin试验第七页，共61页。7 1.3 肺炎链球菌-检测方法第8页乳胶凝集法2免疫学方法3基因检测法4质谱检测法5标本类型：菌液标本类型：尿液、脑脊液科研热点第八页，共61页。8 1.4 肺炎链球菌-药敏分析第9页试验条件培养基：纸片扩散法：含5%绵羊血的MHA接种物：直接菌落悬滴法，相当于0.5麦氏标准孵育： 35±2℃，5%CO2 ；20-24h纸片扩散法检测药敏建议报告抗生素种类：青霉素类：苯唑西林大环内酯类：红霉素磺胺类：复方新诺明喹诺酮类：左氧四环素类：四环素糖肽类：万古霉素增加使用D-抑菌圈试验或肉汤微量稀释法检测诱导型克林霉素耐药的信息。肺炎链球菌A组 首选试验 并常规报告红霉素C组 补充试验 选择性报告 *阿莫西林青霉素　（苯唑西林纸片） *阿莫西林-复方新诺明克拉维酸B组 首选试验 选择性报告 *头孢吡肟　*头孢噻肟*头孢呋辛*头孢曲松头孢洛林(非脑膜炎)克林霉素　多西环素　吉米沙星氯霉素左氧氟沙星　莫西沙星*厄他培南氧氟沙星*亚胺培南*美罗培南　泰利霉素利奈唑胺四环素　万古霉素利福平诱导实验新增修订纸片扩散法第九页，共61页。9 1.4 肺炎链球菌-药敏分析第10页用苯唑西林代替青霉素来进行纸片扩散法检测第十页，共61页。10 1.4 肺炎链球菌-药敏分析第11页PRSP的筛选常规工作中可以用苯唑西林的纸片扩散法来检测青霉素的敏感性。苯唑西林抑菌圈直径≥20mm≤19mm判定青霉素为敏感可能是青霉素结果不可靠必须测定青霉素的MIC此法仅适用于无生命危险感染的患者。 预测β-内酰胺类抗生素敏感第十一页，共61页。11 1.4 肺炎链球菌-药敏分析第12页β-内酰胺类抗生素K-B法未给出标准,推荐用MIC法第十二页，共61页。12 1.4 肺炎链球菌-药敏分析第13页MIC法试验条件方法 ：微量稀释法直接上机(GP-68）及E-test法接种物：0.5麦氏标准孵育 ：35±2℃，5%CO2 ；20-24h 细菌生长区E test 塑料条椭圆形细菌生长抑制区256128 8016判读抑菌浓度（MIC ug/ml)E-test法第十三页，共61页。13 1.4 肺炎链球菌-药敏分析第14页药物敏感中介耐药青霉素注射（非脑膜炎）≤24≥8青霉素注射（脑膜炎）≤0.06-≥0.12口服青霉素≤0.060.12-1≥2脑膜炎分离株，需尽快用可靠方法检测和报告青霉素和头孢曲松(或头孢噻肟或美罗培南)的MIC值对于非脑脊液标本中分离出的肺炎链球菌，需同时使用脑膜炎和非脑膜炎的折点来报告青霉素的敏感性第十四页，共61页。14 1.5 肺炎链球菌-案例分析第15页患者：男60岁，因“突发高热，颈强直，脑膜刺激征，意 识不清住院”。既往史：2008年脑科手术史，术后肺炎