DB15T 2194—2021规模化牛场犊牛腹泻防治技术规范.docx

ICS 65.020.30 CCS B41 内 蒙 15 古 自 治 区 地 方 标 准 DB15/T 2194—2021 规模化牛场犊牛腹泻防治技术规范 Technical specification for calf diarrhea prevention and control in large-scale cattle farms 2021-05-25 发布 2021-06-25 实施 内蒙古自治区市场监督管理局 发 布 前 言 本文件按照GB/T 1.1—2020 《标准化工作导则 第1部分： 标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 本文件由内蒙古自治区畜牧业标准化技术委员会(SAM/TC 19)归口。 本文件起草单位：内蒙古大学、内蒙古农业大学、内蒙古自治区动物疫病预防控制中心、内蒙古蒙 牛乳业(集团) 股份有限公司研究院、赤峰圣泉生态牧业有限公司、内蒙古侩牛物联网服务有限公司。 本文件主要起草人：王炜、徐晓静、王永杰、赵杰军、程晓飞、贺永强、张福隆、田茂、葛旭升、 李庆东、王洪、李瑞东、王潇、李光鹏、胡薇。 规模化牛场犊牛腹泻防治技术规范 1 范围 本文件规定了规模化牛场犊牛腹泻病的诊断和防治。 本文件适用于奶牛饲养场(户) 、肉牛饲养场(户)和动物疾病防治等单位对犊牛腹泻病的防控。 2 规范性引用文件 本文件没有规范性引用文件。 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 犊牛腹泻病 Calf Diarrhea 各种因素导致犊牛发生的一种以消化不良、腹泻为主要症状的消化道疾病。 4 流行特征 本病多见于1月龄内犊牛，一年四季均发，冬季多见。 5 临床特征 病犊牛表现为以下一种或多种临床特征， 包括精神沉郁、体温升高、腹胀、腹痛、废食、呼吸短促、 粪便恶臭、间或混有血丝气泡、急性大量水泻、脱水、自体中毒及心力衰竭等。 6 诊断 6.1 非感染因素分析 本病诊断首先要考虑饲养管理不当、环境因素、应激因素和微量元素缺乏导致的腹泻。在此基础上， 进行病原检测。 6.2 病原诊断 6.2.1 细菌性病原诊断 6.2.1.1 样品采集与处理 6.2.1.1.1 粪拭子 7 防控 用棉签刮取肛门内或地上新鲜粪便，放入装有不含抗生素的PBS或生理盐水的5 mL冻存管中，编号、 记录。 2 ℃~8 ℃运回实验室进行检测。 6.2.1.1.2 组织样品 将病牛剖检后取肠内容物、肠粘膜刮取物、肠组织等， 编号、记录。2 ℃~8 ℃运回实验室进行检 测。 6.2.1.2 核酸检测 用 商品 化检 测试 剂盒 或 特异 性大 肠杆 菌 引物 ( 1F ： 5/-TATCCTCTCTATATGCACAG-3/ ， 1R ： 5/-CTGTAGTGGAAGCTGTTATA-3/；2F: 5/-TCTTTCCCCTCTTTAGTCAG-3/ ，2R: 5/-ACAGGCCGGATTACAACAAAG-3/) 和产气荚膜梭菌引物(F：5/-GCTAATGTTACTGCCGTTGA-3/；R:5/-CCTCGATACATCGTGTAAG-3/) 进行PCR检测。 6.2.2 病毒性病原诊断 6.2.2.1 样品采集与处理 6.2.2.1.1 粪拭子 用棉签刮取肛门内或地上新鲜粪便，放入盛有2 mL~3 mL保存液(含1000 U/mL青霉素、1000 μg/mL 链霉素、400 U/mL庆大霉素和50 U/mL制霉菌素的DMEM培养液) 的5 mL冻存管中，编号，记录。2 ℃~8 ℃ 运回实验室，将棉签拧干取出， 拭子液用直径为0.45μm微孔滤膜过滤后用于检测。 6.2.2.1.2 组织样品 将病牛剖检后取肠内容物、肠粘膜刮取物及肠组织等， 编号、记录。2 ℃~8 ℃运回实验室， 将组 织样品研磨成组织悬液， 用直径为0.45μm微孔滤膜过滤后用于检测。 6.2.2.2 核酸检测 用 商 品 化 检 测 试 剂 盒 或 特 异 性 冠 状 病 毒 引 物 ( F ： 5/-GCCGATCAGTCCGACCAATC-3/ ； R ： 5/-AGAATGTCAGCCGGGGTAT-3/)、轮状病毒引物 (F：5/-TGATGAYTAYCARACDCC-3/；R：-5/-YKYTCWATYCTR TTYYKDAT-3/) 和牛病毒性腹泻病毒引物 (F: 5/-CATGCCCATAGTAGGAC-3/；R: 5/-CCATGTGCCATGTACAG-3/) 进行PCR检测。 6.2.2.3 细胞培养 将处理的样品接种适宜的传代细胞MDBK细胞、 Vero细胞、 MA104、HCT-8细胞或原代细胞进行培养， 根据CPE和特异性中和试验确定病毒类型。 6.