枸杞中槲皮素和烟花苷的测定 高效液相色谱法.pdfVIP

枸杞中槲皮素和烟花苷的测定 高效液相色谱法 1 范围 本文件规定了枸杞中槲皮素和烟花苷的液相色谱检测方法。 本文件适用于枸杞中槲皮素和烟花苷的定性和定量测定。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本 文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和实验方法 NY/T 3950 植物源性食品中 10 种黄酮类化合物的测定 高效液相色谱-串联质谱法 NY/T 3903 枸杞中黄酮类化合物的测定 T/NAIA 050 枸杞及其制品中二氢槲皮素的测定 高效液相色谱法 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4 方法提要 试样经甲醇溶液超声提取后，经反相色谱柱分离，以保留时间定性，用高效液相色谱仪测定 确证，外标法定量。 5 试剂和材料 本方法所用的试剂，除另有规定外，均为分析纯，水为 GB/T 6682 规定的一级水。 5.1 试剂 5.1.1 甲醇：色谱纯。 5.1.2 磷酸 5.1.3 甲醇溶液（80:20，体积比）：将 80mL 甲醇加入到20mL 水中，混合均匀。 5.2 标准品 5.2.1 标准品：槲皮素（Quercetin，CAS 号 117-39-5，C H O ）、烟花苷（Nicotiflorin ，CAS 号 15 10 7 17650-84-9，C27H30O15 ），纯度均≥99% 。 5.2.2 混合标准储备液（1.0mg/mL ）：分别准确称取槲皮素、烟花苷标准品 10mg （准确至 0.1mg ），于 10mL 容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，4 ℃保存。 5.2.3 混合标准中间液（100μg/mL）：分别准确吸取槲皮素、烟花苷标准储备液各 1.0mL 于 10mL 容量瓶中，用甲醇:0.4%磷酸溶液(50:50，体积比)定容。 5.2.4 混合标准使用液：分别吸取混合标准中间液 0.5mL、1.0mL、2.0mL 、4.0mL 、5.0mL 于 10mL 容量瓶中，用甲醇:0.4%磷酸溶液(50:50 ，体积比) 定容至刻度，配制成浓度分别为 5.0μg/mL 、 10.0μg/mL、20.0μg/mL 、40.0μg/mL 、50μg/mL 的混合标准系列工作液，临用现配。 6 仪器和设备 6.1 高效液相色谱仪(HPLC) ：带二极管阵列检测器或紫外检测器。 6.2 分析天平：感量 0.1mg 0.01g 。 6.3 超声波清洗器。 6.4 高速离心机，转速≥4000r/min 。 6.5 匀浆机。 6.6 高速粉碎机。 6.7 微孔滤膜：孔径 0.45μm 。 7 分析步骤 7.1 试样制备 枸杞鲜果、枸杞干果等取代表性样品经匀浆机或高速粉碎机匀浆粉碎后均匀分装，密闭常温或 冷藏保存。 7.2 试样溶液的提取 称取试样 5.0g （精确到 0.01g ）置于 25mL 容量瓶中，加入甲醇溶液(5.1.3)20mL ，超声提取 10min，取出，放冷，用甲醇溶液(5.1.3)定容至刻度，混匀，转移至 50mL 离心管中，8000r/min 离 心 5min，上清液经 0.45μm 微孔滤膜过滤后，上机待测。 7.3 仪器参考条件 7.3.1 色谱柱：C18 色谱柱，4.6*250mm ，5μm，或性能相当。 7.3.2 流动相：甲醇：0.4%磷酸溶液=(50:50 ，体积比) 。 7.3.3 流速：1.0mL/min。 7.3.4 检测波长：360nm 。 7.3.5 进样量：10μL。 7.3.6 柱温：25 ℃。 7.4 校准曲线的制作 将校准曲线工作液按浓度由低到高的顺序各取 10L 分别注入液相色谱仪，测定相应的峰面积， 以校准曲线工作液的质量浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制校准曲线。 7.5 试样溶液的测定 将试样溶液注入液相色谱仪中，以保留时间定性，得到峰面积，根据校准曲线得到待测液中槲 皮素和烟花苷的质量浓度。在上述条件下，槲皮素和烟花苷的色谱图参见附录A 。 8 分析结果的表述 试样中槲皮素和烟花苷含量按式（1）进行计算： C  V  1