qpcr引物设计原则.docxVIP

qpcr引物设计原则 1、引物重要性：引物是PCR技术的关键部件，所以其重要性不必多言。对于引物设计，要仔细考虑引物的结构，如体积、构型及染色体上的位置等，从而确保引物的最优性能。 2、引物的保守性：PCR应根据同一物种的基因序列的相同部分设计引物，以充分利用不同菌株的保守的基因序列，达到最佳的增幅效果。 3、对于引物序列的要求：引物应尽量在保守碱基配对（A-T，T-A，G-C，C-G）的基础上设计，有利于增幅效果；最好使用没有复合半衰期的低温，使放大物在PCR反应中能较快地释放出来，增幅效果更佳，最好也不要在引物序列中包含碱基寡核苷酸。 4、引物的合成：一般用合成的引物来进行PCR反应比用自然的引物好，因为合成的引物比原生的更为稳定，并且可以根据不同的反应条件大量生产。 5、引物夹基本碱基：PCR所有的修饰应尽量与模板核酸序列相匹配，以避免引物结合和模板序列之间出现夹碱基。 6、引物的重复碱基：为避免真核生物基因的重复导致的PCR反应产物的大量扩增，引物的重复碱基应尽量设计在3－5个碱基之内。 7、简化的核苷酸序列：在PCR反应过程中，模板应尽量选择简单的核苷酸序列，以减少反应的复杂度，这样引物设计的简单性就可以改善。 8、引物经济性：PCR技术的发展速度快，反应条件也在不断变化，因此引物的重新设计和更换也是必不可少的。在此过程中，引物的成本要尽量降低，这样PCR产物的生产和检测才能更加便宜有效。 至此，我们介绍的是qPCR引物的设计原则，最终的目的是使qPCR得到最优的效果，从而获得高信噪比的qPCR数据。此外，对于qPCR反应条件的设置，同样要经过多次实验分析，以获得最佳反应效果。