LC-20A柱前衍生化分析饲料中氨基酸含量(异硫氰酸苯酯法)-(2).pdfVIP

岛津应用数据集 ●液相分析 LC-20A 柱前衍生化分析饲料中氨基酸含量 （异硫氰酸苯酯法） 摘要：本文使用岛津LC-20A液相色谱仪建立了柱前衍生法检测饲料中的氨基酸方法。该方法以异硫 氰酸苯酯为柱前衍生剂，使用C18柱，10 mM磷酸缓冲液（pH=6.9 ）和乙腈为流动相，紫外检测器检 测波长254 nm 。六点外标法绘制工作曲线，各氨基酸标准曲线的线性相关系数均在0.9985 以上，各 氨基酸检测限均在1.200 μmol/L 以下；定量限均在3.999μmol/L 以下。保留时间的RSD%在0.06%-0.40% 之间，峰面积的RSD%在0.33%-1.19%之间，结果的重复性良好。15种氨基酸分离度良好，0.5 μmol/mL 标准溶液的15种氨基酸的分离度在1.0 以上。使用此法检测了四种不同基质的饲料实际样品中15种游 离氨基酸。 关键词：柱前衍生法 氨基酸 异硫氰酸苯酯法 前言： 氢二钠、异硫氰酸苯酯、三乙胺、正己烷、HCl 蛋白质是生命的基础，而动物对蛋白质的需 为分析纯级；2.5 μmol/mL 氨基酸标准品（Sigma 求本质上是对氨基酸的需求，因此饲料中氨基酸 出品）。 的种类和含量是衡量其质量高低的一项重要指 仪器：Shimadzu Prominence LC-20A，包括： 标。氨基酸的测定方法很多，国家标准对饲料中 二元泵（LC-20AD×2）、脱气机（DGU-20A ）、 3 氨基酸测定采用柱后衍生、用茚三酮作为衍生剂 自动进样器（SIL-20AC ）、柱温箱（CTO-20A ）、 试剂的离子交换色谱法。此法需专门的仪器，价 紫外检测器（SPD-20A ）及LC Solution 工作站。 格昂贵。随着HPLC技术的发展，用反相柱柱前 1.2 色谱条件 衍生化法测定氨基酸取得了很大发展。本文使用 色谱柱：Inertsil ODS-4 column （3 μm, 异硫氰酸苯酯作为柱前衍生试剂，在岛津 4.6×250 mm ）；流动相：A ：10 mM磷酸缓冲液 LC-20A系统上建立15种氨基酸检测方法 （不包 （pH=6.9 ）；B: 乙腈；流速：1.0 mL/min ；洗脱 含在饲料前处理过程中，被破坏的含硫氨基酸）。 方式：梯度洗脱（梯度见表1）；柱温：40 ℃； 衍生反应见图1，15种氨基酸在254 nm下同时得 检测波长：254 nm ，进样量：5 μL。 到检测，总分析时间为55分钟。 表1. 梯度洗脱程序 O Time Value R1 R1 0 5 N C + H N C COOH N 2 N 8.00 5