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凯氏定氮仪原理和操作步骤 1.有机物中的胺根在强热和CuSO4，浓H2SO4 作用下，硝化生成（NH4）2SO4反应式为2NH2 H2S04 2H＝（NH4）2S04（其中CuSO4 做催化剂）2.在凯氏定氮器中与碱作用，通过蒸馏释放出NH3，收集于H3BO3 溶液中反应式为:（NH4）2SO4 2NaOH＝2NH3 2H2O Na2SO42NH3 4H3BO3＝（NH4）2B4O7 5H2O3.用已知浓度的H2SO4（或 1.有机物中的胺根在强热和CuSO4，浓H2SO4 作用下，硝化生成（NH4）2SO4 反应式为 2NH2 H2S04 2H＝（NH4）2S04（其中CuSO4 做催化剂） 2.在凯氏定氮器中与碱作用，通过蒸馏释放出NH3，收集于H3BO3 溶液中 反应式为: （NH4）2SO4 2NaOH＝2NH3 2H2O Na2SO4 2NH3 4H3BO3＝（NH4）2B4O7 5H2O 3.用已知浓度的H2SO4（或HCI）标准溶液滴定，根据HCI 消耗的量计算出氮的含量，然后 乘以相应的换算因子，既得蛋白质的含量点焊机 反应式为： （NH4）2B4O7 H2SO4 5H2O＝（NH4）2SO4 4H3BO3（NH4）2B4O7 2HCl 5H2O＝2NH4Cl 4H3BO3 凯氏定氮仪操作步骤：（一）消化 1、准备 6 个凯氏烧瓶，标号。1、2、3 号烧瓶中分别加 入适当浓度的蛋白溶液 1.0mL，样品要加到烧瓶底部，切勿沾在瓶口及瓶颈上。再依次加入 硫酸钾-硫酸铜接触剂 0.3g，浓硫酸 2.0mL，30%过氧化氢 1.0mL。4、5、6 号烧瓶作为空白 对照，用以测定试剂中可能含有的微量含氮物质，对样品测定进行校正。4、5、6 号烧瓶中 加入蒸馏水 1.0mL 代替样液，其余所加试剂与 1、2、3 号烧瓶相同。2、将加好试剂的各烧瓶放置消化架上，接好抽气装置。先用微火加热煮沸，此时烧瓶内物质炭化变黑，并产生大 量泡沫，务必注意防止气泡冲出管口。待泡沫消失停止产生后，加大火力，保持瓶内液体微 沸，至溶液澄清后，再继续加热使消化液微沸15min。在消化过程中要随时转动烧瓶，以使内壁粘着物质均能流入底部，以保证样品完全消化。消化时放出的气体内含SO2，具有强烈刺激性，因此自始自终应打开抽水泵将气体抽入自来水排出。整个消化过程均应在通风橱中 进行。消化完全后，关闭火焰，使烧瓶冷却至室温。（二）蒸馏和吸收蒸馏和吸收是在微量凯氏定氮仪内进行的。 凯氏定氮蒸馏装置种类甚多，大体上都由蒸气发生、氨的蒸馏和氨的吸收三部分组成。 1、仪器的洗涤仪器安装前，各部件需经一般方法洗涤干净，所用橡皮管、塞须浸在 10%NaOH 溶液中，煮约 10min，水洗、水煮 10min，再水洗数次，然后安装并固定在一只铁架台上。仪器使用前，微量全部管道都须经水蒸气洗涤，以除去管道内可能残留的氨，正在使用的仪 器，每次测样前，蒸气洗涤 5min 即可。较长时间未使用的仪器，重复蒸气洗涤，不得少于三次，并检查仪器是否正常。仔细检查各个连接处，保证不漏气。首先在蒸气发生器中加约 2/3 体积蒸馏水，加入数滴硫酸使其保持酸性，以避免水中的氨被蒸出而影响结果，并放入少许沸石（或毛细管等），以防爆沸。沿小玻杯壁加入蒸馏水约20mL 让水经插管流入反应室，但玻杯内的水不要放光，塞上棒状玻塞，保持水封，防止漏气。蒸气发生后，立即关闭废液排放管上的开关，使蒸气只能进入反应室，导致反应室内的水迅速沸腾，蒸出蒸气由反 应室上端口通过定氮球进入冷凝管冷却，在冷凝管下端放置一个锥形瓶接收冷凝水。从定氮 球发烫开始计时，连续蒸煮 5min，然后移开煤气灯。冲洗完毕，夹紧蒸气发生器与收集器之间的连接橡胶管，由于气体冷却压力降低，反应室内废液自动抽到反应室外壳中，打开废 液排出口夹子放出废液。如此清洗 2～3 次，再在冷凝管下换放一个盛有硼酸-指示剂混合液的锥形瓶使冷凝管下口完全浸没在溶液中，蒸馏1～2min，观察锥形瓶内的溶液是否变色。如不变色，表示蒸馏装置内部已洗干净。移去锥形瓶，再蒸馏1～2min，用蒸馏水冲洗冷凝 器下口，关闭煤气灯，仪器即可供测样品使用。 2、无机氮标准样品的蒸馏吸收由于定氮操作繁琐，为了熟悉蒸馏和滴定的操作技术，初学 者宜先用无机氮标准样品进行反复练习，再进行有机氮未知样品的测定。常用巳知浓度的标 准硫酸铵测试三次。取洁净的 100mL 锥形瓶五只，依次加入 2%硼酸溶液 20mL，次甲基蓝- 甲基红混合指示剂（呈紫红色）3～4 滴，盖好瓶口待用。取其中一只锥形瓶承接在冷凝管下端，并使冷凝管的出口浸没在溶液中。注意：在此操作之前必须先打开收集器活塞，以免 锥形瓶内液体倒吸。准确吸取 2mL 硫酸铵标准液加到玻杯中，小心提起棒状玻塞使硫酸