化学发光免疫分析的优点.docxVIP

1、灵敏度高： 化学发光免疫分析的优点 这是 CLIA 关键的优越性，其灵敏度可达 10-16/-21mol/L（RIA 为 10-12mol/L）。又如化学发光底物（如 AMPPD）可检测出的碱性磷酸酶的浓度比显色底物要灵敏5х105 倍。2．线性范围宽： 发光强度在 4～6 个量级之间与测定物质浓度间呈线性关系。这与显色的酶免疫分析吸光度（OD 值）为 2.0 的范围相比，优势明显。也优于放射免疫分析技术。 3、安全性好： 彻底消除了放射性危害，环保、安全。 到目前为止，还未发现 CLIA 的危害性。4、试剂有效期长 有效期可长达 1 年以上，放射免疫分析由于放射性同位素的衰变，一般有效期只有一个月， 而酶免的底物贮存性差，都无法与化学发光相比，有效期长可以降低使用成本，利于推广应 用。 5、光信号持续时间长 辉光型（glow type）的CLIA 产生的光信号持续时间可达数小时甚至一天。简化了实验操作及测量。容易实现连续、动态、重复测定 6、分析方法简便快速 绝大多数分析测定均为仅需加入一种试剂（或复合试剂）的一步模式，容易实现自动化。 7、结果稳定、误差小 样品系直接自己发光，不需要任何光源照射，免除了各种可能因素（光源稳定性、光散射、光波选择器等）给分析带来的影响，使分析结果灵敏稳定可靠。 免疫定量分析的两大关键技术: 1、标记技术：决定方法的理论灵敏度 I125、HRP（luminol)、AKP、AE、 ABEI、三联吡啶钌。 2、分离技术：决定方法的实际灵敏度、速度、精密度。 纳米磁性微珠分离 非纳米磁性微珠分离技术：塑料微孔板、塑料试管、大塑料球、高分子微球 化学发光分类 酶促化学发光：HRP（lumino)、AKP ★ 试剂稳定性差 ★ 反应速度慢 ★ 光信号与温度变化显著相关 ★ 综合成本高、发光底物不易保存直接化学发光：AE、ABEI、三联吡啶钌 ★ 试剂稳定性好 ★ 反应速度快 ★ 光信号与温度变化无关 ★ 综合成本底、发光底物易保存 2. 载体的选择： 新固相材料的应用 新固相材料主要体现在(1)表面有与蛋白结合的官能团，可以充分固定抗体抗原；(2)表面性质要保证不影响 结合后蛋白的免疫反应活性；(3)比表面积要足够大以固定足够量蛋白(4)应具有亲水性以避免与待测物和样 品基质的非共价结合；(5)在载液的冲击下保持表面的抗体结合活性。目前用于丌．的固相材料主要有尼龙、琼脂糖凝胶、磁性粒子，以及二氧化硅可控孔度玻璃(Controlled poreglass，CPG)和玻璃微珠_IJ 等有机硅材料。