临床基因扩增实验室建设方案.docx

机构代码 机构代码 PAGE PAGE 2 临床基因扩增实验室建设方案 1、概述 临床基因扩增实验又称PCR 实验,是专门用来检验新型冠状病毒、艾滋病、乙型肝炎、人乳头状瘤病毒等病毒感染性疾病的一种检测手段。它可以通过将病毒体内所含的基因进行扩增的方法,测出一些病 毒含量不高的感染者体内是否含有特定的病毒。由于该检测方法可以测出普通检验难以检测岀的病毒并具有灵敏度高、特异性高、快捷、对样品要求低等优点,因此被临床医生广为认可,已广泛应用于医院的临床诊断和各防疫检测部门的疾病诊断。 新型冠状病毒（2019-nCoV）是人类分离的第七类冠状病毒。该病毒属于β属，有包膜，颗粒呈圆形或椭圆形，常为多形性，直径60-140nm。其基因特征与 SARS-CoV 和 MERS-CoV 有明显区别。目前研究显示与蝙蝠 SARS 样冠状病毒（bat-SL-CoVZC45）同源性达 85% 以上。病毒对紫外线和热敏感，56 度 30 分钟、乙醚、75%乙醇、含氯消毒剂、过氧乙酸和氯仿等脂溶剂均可有效灭活病毒。基于目前的流行病学调查和研究结果，新型冠状病毒潜伏期为 1-14 天，多为 3-7 天；传染源主要是新型冠状病毒感染的患者，无症状感染者也可能成为传染源；主要传播途径为经呼吸道飞沫和接触传播，在相对封闭的环境中长时间暴露于高浓度气溶胶情况下存在经气溶胶传播的可能， 其他传播途径待明确；人群普遍易感。 2020 年 01 月 20 日国家卫健委公告：将新型冠状病毒感染的肺 炎纳入《中华人民共和国传染病防治法》规定的乙类传染病，并采取甲类传染病的预防、控制措施。并纳入《中华人民共和国国境卫生检疫法》规定的检疫传染病管理。实验活动暂按第二类病原微生物进行管理。因此，开展新冠病毒核酸检测需要在法律条规、人员环境、生物安全与防护以及质量控制等方面满足并符合国家相关技术规范要 求。 因此对新型冠状病毒检测需要有能保证绝对安全、配置合理的实验室和非常规范的操作为前提。近年来对临床基因扩增检验实验室的建设越来越得到重视,因为它对检测结果的可靠性、准确性和安全性 起到至关重要的作用。本方案主要从临床基因扩增检验实验室的平面布局,空调通风系统设计、气流控制和污染的防制几个方面对实验室设计中的主要特点进行了阐述。临床基因扩增检验实验室设计的核心问题是如何避免污染。因此,实验室的平面布局、空调通风系统设计、气流控制等都是围绕这个核心问题进行的。下面就对这几个方面分别进说明。 2、PCR 实验室平面布局 临床基因扩增检验实验室原则上分为四个单独的工作区域:试剂贮存和准备区、标本制备区、扩增反应混合物配制和扩增区、扩增产物分析区，同时为了符合新冠实验检测需要增加独立衣帽间方便更换防护装备。为避免交叉污染,进入各个工作区域必须严格遵循单一方向进行,即只能在衣帽间更换防护服后从试剂准备区→标本制备区→ 基因扩增区→扩增产物分析区。各实验区之间的试剂及样品传递应通 过传递窗进行。 3、实验室空调通风系统设计及压力控制 PCR 实验室并没有严格的净化要求,但是为避免各个实验区域间交叉污染的可能性,宜采用全送全排的气流组织形式。同时,要严格控制送、排风的比例以保证各实验区的压力要求。 4、实验室建设及设备 实验室分区功能 分区名称 分区名称 实验室功能 实验室专业要求 存储防护物质和实验前更换 衣帽间 无特殊要求 防护服 试剂的分装和扩增反应混合 应符合生物安全二级实验室防护设备、 试剂准备区 液的准备，以及离心管、吸头等消 个人防护和操作规范的要求 耗品的贮存和准备。 核酸（RNA、DNA）提取、贮 应符合生物安全二级实验室防护设备、 样本制备区 存及制备工作 个人防护和操作规范的要求 应符合生物安全二级实验室防护设备、 扩增区 cDNA 合成、DNA 扩增 个人防护和操作规范的要求 应符合生物安全二级实验室防护设备、 产物分析区 基因扩增产物分析 个人防护和操作规范的要求 、实验室设计要求（仅供参考） 实验 室名称 使 用面积 通风 要求 噪 声 温湿度 相对外 界大气压 不 间断电 大 型落 平 均照度 （㎡） （dB） （Pa） 源 地设 备 （lx） 衣帽 衣帽 10 间 缓冲间 试剂 12 次 ≤6 18~27 ℃ 10 30 20 有 准备区 /h 0 主实验 0 30%~70% 室 5 缓冲间 5 样本 12 次 ≤6 30 18~27 ℃ 30 主实验 有 制备区 /h 0 0 30%~70% 室-5 缓冲间 5 有 扩增 12 次 ≤6 18~27 ℃ 30 20 主实验 （荧光 有 区 /h 0 0 30%~70% 室-10 PCR 仪） 18℃±2 缓冲间 5 产物 12 次 ≤6 ℃ 有 30 30 主实验 （杂交 有 分析区 /h 0 50%