沙门氏菌的检测演示文稿.pptVIP

BS琼脂 现在是30页\一共有43页\编辑于星期三 BS上的菌落 DHL上的菌落 SS上的菌落 现在是31页\一共有43页\编辑于星期三 沙门氏菌的检测演示文稿 现在是1页\一共有43页\编辑于星期三 沙门氏菌的检测 现在是2页\一共有43页\编辑于星期三 一、实验目的 1.掌握沙门氏菌属的检测方法 2.了解沙门氏菌的基本生化反应及原理 现在是3页\一共有43页\编辑于星期三 二、实验器材 1.菌种：沙门氏菌、大肠杆菌 2.检样：鲜鸡蛋 3.培养基：四硫磺酸钠黄绿（TTB）增菌液；氯化镁孔雀绿增菌液（MM)；亚硒酸盐胱氨酸（SC）增菌液；亚硫酸铋（BS）琼脂；HE 琼脂；SS琼脂；三塘铁琼脂（TSI） 4.设备：冰箱、恒温培养箱、均质器、振荡器、电子天平、无菌锥形瓶、无菌吸管、 无菌培养皿、无菌试管、无菌毛细管 现在是4页\一共有43页\编辑于星期三 1.四硫磺酸钠黄绿（TTB）增菌液 基础液 900 mL 硫代硫酸钠溶液 100 mL 碘溶液 20.0 mL 煌绿水溶液 2.0 mL 牛胆盐溶液 50.0 mL 临用前，按上列顺序，以无菌操作依次加入基础液中，每加入一种成分，均应摇匀后再加入另 一种成分。 现在是5页\一共有43页\编辑于星期三 蛋白胨 10.0 g 蒸馏水 1 000 mL pH 7.0±0.2 牛肉膏 5.0 g 氯化钠 3.0 g 碳酸钙 45.0 g（碳酸钙可以调节ph,是培养基在养菌过程中维持一定ph,否则ph过低,影响菌株生长 另外还有筛选产酸菌的作用） 除碳酸钙外，将各成分加入蒸馏水中，煮沸溶解，再加入碳酸钙，调节pH，高压灭菌121 ℃，20 min 基础液 现在是6页\一共有43页\编辑于星期三 硫代硫酸钠溶液 硫代硫酸钠（含5 个结晶水） 50.0 g 蒸馏水 加至100 mL 高压灭菌121 ℃，20 min。（硫代硫酸钠作为中和剂，可以灭菌121,15min，没有影响的，检验含有次氯酸钠的消毒水微生物，需要加入1.5%硫代硫酸钠溶液；培养基中硫代硫酸钠和磺所生成的四硫磺酸，能抑制大部分大肠埃希氏菌的生长，而伤寒与副伤寒沙门氏菌仍能生长，因为沙门氏菌具有四硫磺酶，能分解四硫磺酶。） 现在是7页\一共有43页\编辑于星期三 　ＴＴＢ培养基使用方法和注意事项 　 1.使用方法：称取本品93.55g，溶解于1050ml蒸馏水中，加热溶解，临用前加入20％碘液20ml,0.5g煌绿2ml。 2.注意事项：ＴＴＢ培养基不加碘液可在4-10度冰箱保存。加入碘液后必须在几小时内使用。培养基中有白色碳酸钙沉淀为正常现象。 现在是8页\一共有43页\编辑于星期三 3.原理：四硫酸钠是由硫代硫酸钠和碘经氧化生成而来，它对大肠菌群有抑制作用，对沙门氏菌无影响。因沙门氏菌具有四硫磺酸酶，能分解四硫磺酸钠，而大肠菌群没有这种酶，故生长受抑制。碳酸钙为缓冲剂，可使沙门氏菌不致因酸碱度改变而死亡。 现在是9页\一共有43页\编辑于星期三 2.氯化镁孔雀绿增菌液（MM) 甲液：胰蛋白胨5g； 磷酸二氢钾1.6g ；氯化钠8g蒸馏水1000ml； 2.乙液：氯化镁40g；蒸馏水100ml 3.丙液：0.4%孔雀绿水溶液 4.制法 :上述成分配好后，121度高压灭菌15min，临用时取甲液90ml；乙液9ml 丙液0.9ml 现在是10页\一共有43页\编辑于星期三 MM增菌液各成分的作用 胰蛋白胨提供氮源和碳源满足细菌生长的需求； 氯化钠可维持均衡的渗透压； 磷酸二氢钾是缓冲剂； 氯化镁可以增加培养基的渗透压； 孔雀绿抑制非沙门氏菌的生长， 较低的pH结合氯化镁和孔雀绿使培养基具有较高的选择性。 现在是11页\一共有43页\编辑于星期三 3.亚硒酸盐胱氨酸（SC）增菌液 成分 蛋白胨 5.0 g 乳糖 4.0 g 磷酸氢二钠 10.0 g 亚硒酸氢钠 4.0 g L-胱氨酸 0.01 g 蒸馏水 1 000 mL pH 7.0±0.2 制法 除亚硒酸氢钠和L-胱氨酸外，将各成分加入蒸馏水中，煮沸溶解，冷至55℃以下，以无菌操作加入亚硒酸氢钠和1g/L L-胱氨酸溶液10 mL（称取0.1 g L-胱氨酸，加1mol/L 氢氧化钠溶液15mL， 使溶解，再加无菌蒸馏水至100mL 即成，如为DL-胱氨酸，用量应加倍）。摇匀，调节pH。 现在是12页\一共有43页\编辑于星期三 SC增菌液各成分的作用 蛋白胨提供碳源满足细菌生长的需求， 乳糖是可发酵的糖类； 亚硒酸氢钠抑制革兰氏阳性菌和非沙门氏菌的大多数革兰氏阴性菌的生长， 磷酸盐是缓冲剂， L-胱氨酸为还原剂。 现在是13页\一共有43页\编辑于星期三 4.亚硫酸铋（BS）琼脂