从业人员健康体检沙门氏菌、志贺氏菌检测操作程序.pdfVIP

从业人员健康体检沙门氏菌、志贺氏菌检测操作程序--第1页 从业人员健康体检沙门氏菌、志贺氏菌检测操作程序 一、目的 本程序用于对从业人员健康体检进行沙门氏菌、志贺氏菌检测等致病 菌检测 的方法，以规范操作程序，保证检测数据的有效性。 二、适用范围： 本方法适用于从人体粪便中沙沙门氏菌、志贺氏菌的分离、鉴定及保 存的梯相关操作。 三、生物安全要求 标本及相应的致病菌操作必须在 BSL-2 生物安全实验室的生物安全 柜中进行。 四、试剂及仪器设备 试剂 采便盒、Cary-Blair运送培养基、亚硒酸增菌液（SF）、改良亚硒酸 盐磺绿增菌肉汤（SBG）、沙门志贺培养液、木糖-赖氨酸-脱氧胆酸琼 脂（XLD）、麦康凯琼脂、沙门显色培养基、结晶紫沙门培养基（YS）、 三糖铁（TSI）、动力-吲哚-尿素培养基 （MIU）、沙门氏菌属诊断血清、 志贺氏菌属诊断血清、API20E生化试剂条、磁珠菌种保存管 仪器设备 恒温培养箱、微生物鉴定仪 五、采样方法 标本应为新鲜的或转移至Cary-Blair运送培养基的粪便或肛拭子， 最优标本是转移到Cary-Blair运送培养基的粪便拭子。肛拭子不是 从业人员健康体检沙门氏菌、志贺氏菌检测操作程序--第1页 从业人员健康体检沙门氏菌、志贺氏菌检测操作程序--第2页 最佳标本，仅在病人无粪便标本时采用。 粪便标本：应采集自然排出的新鲜粪便，取稀水样、粘血样、脓血 样，黏液样部分。盛于清洁、干燥、无吸水性的无菌容器，避免混入 尿液、水和其他物质。 肛拭标本 ：若无法获得粪便（如排便困难或婴幼儿），也可以采用肛 拭子，即无菌棉拭子用生理盐水湿润后，插入肛门内4-5cm处〈儿童 约 2-3cm），同一方向轻轻旋转2-3 周。以目测能见到粪便为准。插 入Cary-Blair运送培养基。 标本采集后立即送至实验室进行检测，若室温保存，不能超过1h； 如不能立即送检，应放入Cary-Blair运送培养基中冷藏条件下24小 时内送检。 六、检验程序 粪便标本或肛子 XLD或麦康凯 SBG增菌 XLD或显色平板 可疑菌落接种TSI和MIU 可疑菌落接种TSI和MIU 生化符合者做血清凝集和 生化符合者做血清凝集和系 系统生化反应 统生化反应 菌株保存管保存菌株上送 七、操作步骤 从业人员健康体检沙门氏菌、志贺氏菌检测操作程序--第2页 从业人员健康体检沙门氏菌、志贺氏菌检测操作程序--第3页 分别标记一个 XLD 平板（或 YS 平板、麦康凯平板）和 1 管 9ml 改良亚硒酸盐磺绿增菌肉汤（SBG）（或 SF 增菌液或沙门志贺培养液）。 用 1 个无菌拭子取少量标本（不要使拭子 粘得太多，尽量从可 见血或黏液的部位收集）接种在 XLD 平板的第一区，接着把拭子放入 SBG 增菌液。再灭菌接种环在 XLD 平板的其余区进行划线接种。如果 是 Cary-Blair 运送培养基的粪便拭子，则轻搅混合标本后接种增菌 液与平板。 所有