《饲料中玉米赤霉烯酮的快速检测 时间分辨荧光免疫层析定量法》.pdfVIP

目 次 前 言 III 1 范围 1 2 规范性引用文件 1 3 术语和定义 1 4 原理 1 5 试剂和材料 2 6 仪器和设备 3 7 样品制备 3 8 样品前处理 3 9 标准曲线制定 3 10 检测过程 3 11 结果计算 4 12 方法性能 4 DB32/T xxxx—2022 饲料中玉米赤霉烯酮的测定 时间分辨荧光免疫层析定量法 1 范围 本文件规定了饲料中玉米赤霉烯酮测定的原理、试剂和材料、仪器和设备、样品制备、样品前处 理、标准曲线制定、检测过程、结果计算和方法性能。 本文件适用于饲料原料、浓缩饲料、配合饲料、精料补充料等试样中玉米赤霉烯酮的测定。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文 件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适 用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 14699.1 饲料 采样 GB/T 20195 动物饲料 试样的制备 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 时间分辨荧光微球 time resolved fluorescent m icrosphere 形状为球形，直径在几纳米至几十微米之间，微球表面或内部负载有荧光物质，在受到一定的能 量激发时能够发出荧光的微粒，比普通荧光半衰期长。微球表面修饰有合适密度的羧基或其它功能基 团，用于与蛋白或抗体的共价偶联；微球所包理的镧系稀土元素经过了鳌合，无需解离增强步骤。 3.2 时间分辨荧光免疫层析定量法 time resolved fluorescence immunochromatography quantitative method 用时间分辨荧光微球标记抗原或抗体制作层析试纸条，根据时间分辨荧光微球的发光特点，用时 间分辨技术测量荧光，同时检测波长和时间两个参数进行信号分辨的方法，可有效地排除非特异性荧 光的干扰，极大地提高了分析灵敏度。 4 原理 试样中玉米赤霉烯酮与时间分辨荧光微球标记的特异性抗体结合后，抑制了层析过程中标记抗体 与试纸条 T 线玉米赤霉烯酮抗原的免疫反应，使 T 线时间分辨荧光强度降低，质控线 C 线结合的荧光 1 DB32/T xxxx—2022 标记物浓度与样品中玉米赤霉烯酮的浓度无关。层析结束后，通过仪器检测计算试纸条 T 线和 C 线的 时间分辨荧光强度比值和设定的标准曲线进行准确定量分析。 5 试剂和材料 除另有规定外，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的二级水。 5.1 十二水磷酸氢二钠 （Na HPO ·12H O）。 2 4 2 5.2 磷酸二氢钾（KH PO ）。 2 4 5.3 氯化钾（KCl）。 5.4 氯化钠（NaCl）。 5.5 盐酸（HCl）。 5.6 甲醇（CH OH）。 3 5.7 蔗糖（C H O ）。 12 22 11 5.8 吐温-20 （C H O ）。 58 114 26 5.9 磷酸盐缓冲溶液：取 2.178 g 磷酸氢二钠（5.1）、0.144 g 磷酸二氢钾（5.2）、0.12 g 氯化钾 （5.3）、4.8 g 氯化钠（5.4），溶解于 1 L 水中，用适量盐酸 （5.5）调 pH 至 6.8～7.2。 5.10 提取液：取 800 mL 甲醇（5.6）用纯水定容至 1 L，用于样品提取。 5.11 稀释液：在 1 L 磷酸盐缓冲溶液（5.9）中分别加入 1.0 g 蔗糖（5.7）、2.