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第一页，共十三页，2022年，8月28日 任务：对位红检测及标准 检测方法 一、液相色谱法 高效液相色谱法 凝胶净化液相色谱法 反相高效液相色潽法 二、分光光度法--紫外可见分光光度计 第二页，共十三页，2022年，8月28日 1.对位红的简介 对位红亦称对硝苯胺红，常温下呈固态，密度 1.50g/cm3,熔点248-252℃。是一种常用的红色 颜料，属于重氮系列化工合成染色剂，主要应用 于机油，蜡，油彩，汽油等工业产品。 对位红的熔点即已达到250 ℃，明显不能采用气 相色谱法来进行检验，因为样品很难汽化。所以 我们采用液相色谱法来对其进行检测。 第三页，共十三页，2022年，8月28日 1.1高效液相色谱法 优点：操作简单，灵敏可靠，结果令人满意 应用范围：食品及调味品中对位红、苏丹红的检测 对位红检测主要仪器与试剂：LC2010- A B 型高效液相色谱仪( 配有紫外可见光检测器) ( Shimazdu 公司, 日本) 。甲醇( 色谱纯, 美国T EDIA 公司) , 正己烷( 分析纯, 成都市科龙化工试剂厂) , 氯仿( 分析纯, 重庆川东化工有限公司) , 丙酮( 分析纯, 成都市科龙化工试剂厂) , 无水硫酸钠( 分析纯, 重庆北碚化学试剂厂) , 苏丹红??( 97. 5% ) 、苏丹红 ( 90. 0%) 、苏丹红!( 97. 0%) 、苏丹红?( 91. 0%) 、对位红( 95.5%) 标准品( Dr. Ehrenstor fer GmbH 公司,德国) , 层析用氧化铝( 中性, 100~ 200 目)( 上海陆都化学试剂厂) , 1 cm( 内径) 5 cm( 高) 注射器管( 上海金塔医用器材有限公司) 。标准溶液: 精密称取苏丹红??、苏丹红、苏丹红!、苏丹红?、对位红标准品各10 . 0 mg( 按其标称含量折算) , 用丙酮溶解并定容至250 mL, 分别配成40 mg/ L 的标准储备溶液。取标准储备溶液用丙酮配成0. 16、0. 32、0. 64、1. 28、2. 56 mg/ L 的标准系列溶液。 第四页，共十三页，2022年，8月28日 检测操作步骤 1、流动相的配制及预处理 2、标准溶液配制 3、样品溶液配制 4、液相色谱仪的开机 5、液相色谱工作站设置 6、走基线 7、进样 8、数据采集 9、标样及试样进样 第五页，共十三页，2022年，8月28日 1.2凝胶净化液相色谱法 优点：操作简单，填充完凝胶柱后可重复使用，实际用量少于欧盟及国标方法，并且用淋洗液替代剧毒而又昂贵的乙腈进行提取，自制凝胶柱净化富集避免了欧盟方法用乙腈直接萃取进样对色谱柱寿命的影响及杂质峰的干扰，也避免了国标方法中采用氧化铝柱净化活度难以控制的麻烦，一次进样可同时检测食品中对位红、苏丹红的含量 应用范围：食品及调味品中对位红、苏丹红的检测 仪器及试剂：Agilent 1100 高效液相色谱仪(含二极管阵列检测器、柱温箱、自动进样器)层析柱 1. 6 cm ×50 cm ,填充Bio2Beads S2X3凝胶。苏丹红Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ及对位红标准品,纯度均大于95 % ,配制时用少量三氯甲烷溶解,乙腈定容为0. 500 0 g ·L - 1 储备液(按实际含量折算) ,使用时用乙腈稀释至所需浓度。 第六页，共十三页，2022年，8月28日 色谱条件 色谱柱Zorbax SB2C18 ( 4. 6 mm ×250 mm ,5μm) ;流动相:乙腈(A) + 酸性水溶液(用乙酸调至约p H 4. 0) ; 洗脱程序: 0 ～ 9 min A 90 %; 9 ～12 min ;A 线性变化到100 % ,保持5 min 后回到初始比例;流速1. 0 mL ·min - 1 ;柱温35 ℃;进样量20μL ;二极管陈列检测器,程序可变波长见表1 。 第七页，共十三页，2022年，8月28日 1.3反相高效液相色潽法 简介：在推荐参考方法的基础上,对分离和色谱条件加以改进、优化、选择,用于几种含对位红食品采用拟定的方案进行分离检测。结果:方法的检出限为011μg/ml,标准曲线的线性相关系数( r) 019999,在014-116μg/ml添加水平间,加标的回收率95% ～105% , RSD 019% ～911%。改进的方法准确可靠,检测效率高,具有实际应用意义。 应用：测定食品中对位红的残留量 第八页，共十三页，2022年，8月28日 仪器、试剂及色谱条件 仪器设备　Waters 2695 型高效液相色谱仪。Waters、996型二极管阵列紫外检测器。MilliQ p lus型超纯水器,美国Millipore公司产品。超声波清洗器。 试剂　对位红标准品(95% ,Acros Organics, USA) ;乙腈(