特异性IgE检测标准操作规程.docx

特异性 IgE检测标准操作规程 ××医院检验科临床免疫室作业指导书 文件编号:XXX 生效日期： 共 页 第 页 1. 目的 建立检测血清特异性IgE含量的标准操作规程，保证实验结果的精确性及准确性。 2. 原理 2．1 ·荧光酶标法。 2．2 ·荧光酶标法是利用酶标技术、CAP专利技术和血清中的抗体相结合的测定方法，用 酶标二抗(Conjugate) 中的酶作为标记物，以内置有多孔性弹性和亲水性的纤维素粒的(CAP) 作为固相载体，提供最大的接触反应面积。 3. 标本要求 3．1 ·抽取干燥管(无抗凝) 静脉血 3．0 ml，3 000 r／min离心 10 min，取血清检测。溶血或 严重脂血影响检测结果时，需重新抽血。 3．2 ·标本的稳定性：分离血清室温8h内检测，超过时间放2~8℃，保存24h。 4. 试剂与仪器 4．1 ·试剂组成：ImmunoCAP、酶标二抗(β 半乳糖苷酶标记的鼠抗人IgE单克隆抗体) 、 底物(4 甲基伞桂 β 半乳糖苷) 、洗液、终止液、标准品、质控品。 4．2 ·仪器：Phadia×××全自动体外免疫诊断仪。 5. 操作步骤(具体参照仪器标准操作规程) 5．1 ·开机 5．1．1 在 Wash瓶中装入洗液，Rinse瓶中装入蒸馏水，倒空废液罐内废水。 5．1．2 打开 IDM电脑并运行 IDM软件，打开 Phadia 250 设备绿色电源按钮，设备进入 待机状态，大约3minPhadia250操作软件ISW 启动，进入“StandBy”状态。 5．2 ·装载试剂在 Phadia250软件上选“Load”按钮，进入试剂“ Load ”界面。装入一批 完整的检测“AssayRun”所用的所有试剂(360个测试) 。在各种试剂相应的 Load界面，通过 条码器扫描试剂标签，将试剂放入对应位置。 5．3 ·样本检测，结果审核。 5．4 · 日维护后自动关机。 6. 校准 仪器校准：① 28天校准一次；② 试剂批号更换时；③ 由质控及标本检测结果决定，如质 控结果超出范围时。 7. 质控 用质控品 1(低值质控品) 和质控品 2(高值质控品) ，至少每 24h或每一次校准后测定一 次。质控间隔期应适用于各实验室的具体要求。检测值应落在确定的范围内，如出现质控值 落在范围以外，应采取校正措施。 8. 结果判断 仪器会根据校准曲线和检测标本测得的荧光数值，自动计算检测标本浓度。 9. 生物参考区间 0~30 U／ml。 10. 性能参数 具体参见试剂说明书，按照相关要求对方法学进行验证。 11. 临床意义 11．1 ·特异性IgE的测定是利用抗原抗体结合的特异性，测定变应原特异性的循环 IgE 抗体，是机体对致敏变应原的客观测定指标。SIgE浓度在 1 级以上就表明过敏患者血清中存 在着对变应原的特异性 IgE。 11．2 ·测定特异性IgE水平帮助确定致敏变应原，预测未来发展变态反应的危险并指导 临床确定致敏变应原。 11．3 ·预测未来发展的变态反应。 11．4 ·指导临床方案，提供特异性皮炎的最佳确诊方法。 11．5 ·变应原虽有90％~100％特异性，但有明显地域性，须注意生产国变应原与我国的 实际情况不完全相符。如国外普遍变应原为豚草，我国常见变应原为葎草；还有同属不同种 问题，如我国皮试用产黄青霉，但 SIgE测定为特异青霉，临床会有可能导致皮试与 SIgE不一 致的情形出现。