多种呼吸道过敏原筛选检测标准操作规程.docx

多种呼吸道过敏原筛选检测标准操作规程 ××医院检验科临床免疫室作业指导书 文件编号:XXX 生效日期： 共 页 第 页 1. 目的 建立检测血清多种呼吸道过敏原筛选含量的标准操作规程，保证实验结果的精确性及准确性。 2. 原理 2．1 ·荧光酶标法。 2．2 ·荧光酶标法是利用酶标技术、CAP专利技术和血清中的抗体相结合的测定方法，用 酶标二抗(Conjugate) 中的酶作为标记物，以内置有多孔性弹性和亲水性的纤维素粒的(CAP) 作为固相载体，提供最大的接触反应面积。 3. 标本要求 3．1 ·抽取干燥管(无抗凝) 静脉血 3．0 ml，3 000 r／min离心 10 min，取血清检测。溶血或 严重脂血影响检测结果时，需重新抽血。 3．2 ·标本的稳定性：分离血清室温8h内检测，超过时间放2~8℃，保存24h。 4. 试剂与仪器 4．1 ·试剂组成：ImmunoCAP、酶标二抗(β 半乳糖苷酶标记的鼠抗人IgG单克隆抗体) 、 底物(4 甲基伞桂 β 半乳糖苷) 、洗液、终止液、标准品、质控品。 4．2 ·仪器 ：× × ×全自动体外免疫诊断仪。 5. 操作步骤(具体参照仪器标准操作规程) 5．1 ·开机 5．1．1 在 Wash瓶中装入洗液，Rinse瓶中装入蒸馏水，倒空废液罐内废水。 5．1．2 打开 IDM电脑并运行 IDM软件，打开 ×××仪器设备绿色电源按钮，设备进入 待机状态，大约 3 min ×××仪器操作软件ISW 启动，进入“StandBy”状态。 5．2 · 装载试剂在软件上选“Load”按钮，进入试剂“ Load ”界面。装入一批完整的检测 “AssayRun”所用的所有试剂(360个测试) 。在各种试剂相应的 Load界面，通过条码器扫描 试剂标签，将试剂放入对应位置。 5．3 ·样本检测，结果审核。 5．4 · 日维护后自动关机。 6. 校准 仪器校准：① 28天校准一次；② 试剂批号更换时；③ 由质控及标本检测结果决定，如质 控结果超出范围时。 7. 质控 用质控品 1(低值质控品) 和质控品 2(高值质控品) ，至少每 24h或每一次校准后测定一 次。质控间隔期应适用于各实验室的具体要求。检测值应落在确定的范围内，如出现质控值 落在范围以外，应采取校正措施。 8. 结果判断 仪器会根据校准曲线和待测标本测得的荧光数值，自动计算待测标本浓度。 9. 生物参考区间 阴性。 10. 性能参数 具体参见试剂说明书，按照相关要求对方法学进行验证。 11. 临床意义 11．1 · 呼吸道变态反应性疾病在变态反应科临床工作中占有相当大的比重。有些病很 难从临床上区别是否过敏。如过敏性鼻炎和血管运动性鼻炎的临床表现相似；外源性哮喘和 内源性哮喘也有共同之处，在临床工作中首先要解决是否属过敏范畴问题。血清总 IgE作为 变态反应病过筛试验有一定的参考价值，然而，正如前面所述，总 IgE高不一定是过敏；“正 常”的总IgE也不能排除特异性过敏。过敏与否主要取决于 SIgE 的存在。 ×××仪器是根 据变应原吸附原理，将空气中 95％以上最为常见的多种气传变应原吸附在一个 CAP上，可用 于筛检呼吸道变态反应病。患者血清中只要有针对其中之一变应原的 SIgE，即可阳性反应。 它是特应性和非特应性疾病的过筛检测，是特应性过敏反应检测第一步。患者血清中的特异 性IgE抗体与 CAP结合的相应变应原进行反应。在儿童、青少年和成人检测能准确判断该 患者是否是变态反应。 11．2 ·筛选检测阳性只说明有过敏，提示机体存在特应性过敏反应，但对何种变应原过 敏，仍需再进一步做特异性检测来确定。 11．3 ·筛选检测阴性的结果提示该症状不是由常见环境变应原引起，医生可以探寻其他 原因。 11．4 ·年龄在0~3岁的年幼儿童，变态反应大多数与食物变应原相关，如鸡蛋、牛奶、黄 豆和花生，而非吸入性变应原。然而，对吸入性变应原的特异性抗体(如屋尘螨和宠物) 也可 在幼年出现。结合检测结果，只需很少量的血样即可对小儿的变态反应作出高度准确的 诊断。 11．5 ·筛选检测的结果可视为多种 SIgE 的总和。但未包括葎草花粉和蚕丝，这两种在 我国都是重要的变应原，如患者只对葎草花粉和蚕丝过敏，×××检测会阴性；但如果同时还 合并有对其他变应原过敏，×××结果仍可阳性。