呼吸道过敏原12项检测标准操作规程.docx

呼吸道过敏原 12项检测标准操作规程 ××医院检验科临床免疫室作业指导书 文件编号:XXX 生效日期： 共 页 第 页 1. 目的 建立检测血清吸入过敏原含量的标准操作规程，保证实验结果的精确性及准确性。 2. 原理 2．1 ·免疫印迹法。 2．2 ·标本中过敏原特异性IgE抗体与吸附在硝酸纤维素膜上的过敏原发生抗原抗体特 异性反应，形成抗原抗体复合物，标记了生物素的抗人IgE抗体与抗原抗体复合物反应，结合 有碱性磷酸酶的链霉亲和素，生物素结合。碱性磷酸酶与底物 BCIP／NBT发生特定的酶显色 反应。颜色深浅与血清中 sIgE抗体含量成正比。 3. 标本要求 3．1 ·抽取干燥管(无抗凝) 静脉血 3．0 ml，3 000 r／min离心 10 min，取血清检测。溶血或 严重脂血影响检测结果时，需重新抽血。 3．2 ·标本的稳定性：分离血清室温8h内检测，超过时间放2~8℃，保存24h。 4. 试剂与仪器 4．1 · 试剂组成：检测条标记有过敏原的硝酸纤维素膜，置于塑料反应槽中。洗脱液： 20 ml，TRIS／NaCl，可稀释成500ml的清洗液，pH＝7．5；抗人IgE抗体：4ml，标记有生物素 的，含0．1％NaN3 ；链霉亲和素：4ml，连接有碱性磷酸酶；BCIP／NBT：4 ml。 4．2 ·仪器：符合 CE标准的 ×××免疫印迹法半自动操作仪。 5. 操作步骤 5．1 ·检测试剂量，保证试剂量充足，试剂和样本恢复到室温(20~22℃) 。 5．2 ·将所需试剂条标注后固定在试剂条架上，用缓冲液湿润膜条，再把试剂条架固定在 支持平板上。(注意：标注的黑色字体不要太靠近膜条，防止读取结果时产生干扰) 5．3 ·试剂位及清洗缓冲液位置上均放置去离子水。 5．4 ·开机，系统提示“BeeBlot准备就绪，按‘开始’”。按“Start”键，选择 1 号位程序，按 “Start”键开始 A／B循环清洗管路。 5．5 ·将试剂及缓冲液放置在对应位置。按“Start”键，设备开始湿润条带。 5．6 ·湿润结束后仪器提示，取下试剂条架，手动加样，加样完成后按“Start”键继续。 5．7 ·实验结束后，从支持平板上取下试剂条架，用吹风机干燥试剂膜，试剂管道放入去 离子水中按“Start”键开始 A／B循环清洗管路。 5．8 ·剩余试剂放回 4℃冰箱。试剂条在过敏原检测仪上读数。 5．9 ·仪器结束清洗后，按“Quit”退出程序，再关闭电源。 6. 校准 仪器校准：定期校准仪器震动频率。 7. 质控 7．1 · 自配适用于各实验室的具体要求(质量目标) 的质控品。 7．2 ·试剂膜条自带质控带(不显色为失控) 。 8. 结果判断 8．1 · 肉眼判读：将已温育的湿的实验膜条置于结果判定模板中的塑料膜上，并与标志对 齐。用吸水纸小心吸去水分(完全干后，膜条将黏附于塑料膜上) 。将干的实验膜条上出现的 与参照膜条上的标志相对应的清晰可见的条带记录在结果判定模板上，在相应抗原的位置出 现白色条带为阴性。 8．2 ·本实验室用 × × ×仪器软件自动判断结果。 8．3 ·将实验膜条放置在一张特殊的工作单上。实验膜条如需长期保存，可用黏性塑料 膜密封，在实验栏选择相应的实验代码，膜条上有质控带。质控带出现强的颜色反应，表明实 验结果可靠。 9. 生物参考区间 阴性。 10. 性能参数 具体参见试剂说明书，按照相关要求对方法学进行验证。 11. 临床意义 11．1 ·过敏原筛查检测适应人群：过敏原因不明的患者，湿疹、荨麻疹、过敏性鼻炎、哮 喘、银屑病等患者都应做一下过敏原检测，这样对预防和治疗疾病都有很大的帮助。 11．2 ·过敏性疾病的诊断不能仅仅根据实验室检测结果，而应和既往病史及当前临床表所示现(体内和体外多种试验的结果) 一起综合考虑。 11．3 ·分级的测试结果可以用于判断患者对某一过敏原的过敏程度。测定血清特异性 抗体与体内检测(如皮试) 同样重要和可行。需要强调的是，体外检测是唯一可频繁使用的确 定 Ⅰ 型变态反应敏感度的方法。 11．4 ·本系统以特定的过敏原条带显色，指示患者血清中有相关的IgE抗体，但这并不说 明所有这些患者都会伴有相关的临床症状，因为他们可能只处于致敏状态，而尚未有相关临 床表现。