光遗传专题的学习资料.pptxVIP

光遗传专题的学习资料第1页/共13页第2页/共13页01光遗传学介绍content02光遗传学的研究步骤03激活神经元的通道蛋白04抑制神经元的通道蛋白05光遗传学的研究内容06光遗传学的应用前景第3页/共13页光遗传学介绍1.光遗传学（Optogenetics）是结合了光学（Optics）及遗传学（Genetics）的技术，能在活体动物甚至是自由运动的动物脑内，精准地控制特定种类神经元的活动。光遗传学在时间上的精确度可达到毫秒级别，在空间上的精确度则能达到单个细胞级别。2010年，光遗传学被Nature Methods选为年度方法，同年被Science认为是近十年来的突破之一。 这项技术目前在神经科学领域应用非常广泛，未来可能会应用于多种神经和精神疾病的治疗，如帕金森氏病、阿尔茨海默病、脊髓损伤、精神分裂症等第4页/共13页光遗传学介绍1.光遗传学光学遗传学一、将光敏感的分子或光敏感的离子通道转移到神经细胞里面；二、用光来照射这个神经细胞使神经细胞被激活或抑制。第5页/共13页光遗传学的研究步骤寻找合适的光敏蛋白 光敏蛋白可分为激活型和抑制型两种， 能够引起神经元兴奋或抑制起兴奋神经元作用的Channelrhodopsin-2（ ChR2）起抑制神经元作用的Halorhodopsin（ NpHR）和Archaerhodopsin（ Arch） 2.向靶细胞内导入光敏蛋白基因 通过病毒转导、 转染、 转基因动物等方式将光敏蛋白的遗传信息传递给靶细胞 对光信号进行时空调控 采用导入光纤或控制激光的方式将光导入研究区域选择不同的参数（ 波长、光强度、频率和占空比）进行光刺激，来达到对神经元活动的时间调控；通过选择性地照射细胞局部的方法来实现对神经元活动的空间调控。 收集输出信号，读取结果 采用电极记录神经元细胞膜内外的电压变化，并可用荧光性生物传感器来检测不同细胞数值，通过电生理记录或行为学测试等方法，将光刺激对神经元、神经回路或动物行为的改变呈现出来。 第6页/共13页光遗传学的研究步骤2.光遗传学遗传操作光学控制操作病毒表达或转基因光源（激光/LED）光纤、跳线等第7页/共13页光遗传学的研究步骤2.2.Inset construct virus1.Piece together genetic construct3.Inject virus into animal brain，opsin is expression in targeted neuronsPromoter to drive expressionGene encoding opsin(light-sensitive ion channel)光敏蛋白表达4.Insert ‘optrode’,fibre-optic cable plus electrode5.Laser light of specific wavelength opens ion channel in neurons6.Record electrophysiological and behavioural results光敏蛋白被光激活第8页/共13页激活神经元的通道蛋白3.ChR2(H134R)ChR2ChR2(C128S/D156A)ChR2(E123T/T159C)C1V1ChETA野生型ChR2，是一种在单细胞蓝藻中存在的感光蛋白,其在细胞膜上形成阳离子通道。当表达ChR2的细胞受到蓝光照射时,通道开放,导致细胞去极化。ChR2的突变体，将第134个氨基酸由组胺酸突变为精胺酸，该蛋白质可以产生两 倍的光电流，但通道开关速度也比野生的ChR2慢了一倍ChR2的突变体，超灵敏光敏感通道，用蓝色激光打开通道，然后用绿色或 黄色激光关闭通道，可以打开其离子通道长达30分钟ChR2的突变体，更大的光电流和更快的动力学变化由ChR1及由团藻发现的VChR1组合在一起的通道蛋白，在红色激光刺激下打开通道ChR2的突变体，使得神经元在激光刺激下可以发放200Hz的spike，而其他的ChR2 通道 蛋白只能达到40Hz第9页/共13页抑制神经元的通道蛋白4.NpHReNpHR2.0eNpHR3.0ArchMac?一种黄色激光激活的外向整流质子泵，能够将带正电的质子从神经元内移动到细胞外环境中，使神经元处于超极化状态，从而保证神经元处于静息状态。在特定条件下，可用于增加细胞内pH或减少细胞外基质pH。和NpHR相比，当激光关闭的时候，Arch立即从通道打开状态恢复到关闭状态蓝色激光激活的质子泵，能够将带正电的质子从神经元内移动到细胞外环境中，使神经元保持超极化状态，从而保证神经元处于静息状态，使用的较少Copy paste fonts. Choose the only option to retain text