DB15T 1648-2019蒙桑组织培养育苗技术规程.docxVIP

ICS 65.020.20 B 05 内 蒙 DB15 古 自 治 区 地 方 标 准 DB15/T 1648—2019 蒙桑组织培养育苗技术规程 Tissue culture technical regulation of Morus mongolica 2019-05-20 发布 2019-08-20 实施 内蒙古自治区市场监督管理局 发布 目 次 前言 II 1 范围 1 2 规范性引用文件 1 3 术语和定义 1 4 环境及器具灭菌 1 5 培养基配制 2 6 外植体选取及灭菌 3 7 初代培养 4 8 继代培养 4 9 生根培养 4 10 炼苗与培养 5 11 病虫害防治 6 附录 A (资料性附录) MS 培养基母液配制表 7 前 言 本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。 本标准由内蒙古自治区林业和草原局提出并归口。 本标准起草单位：内蒙古和盛生态科技研究院有限公司、内蒙古农业大学、内蒙古和盛生态育林有 限公司、北京蒙树生态环境工程有限公司。 本标准主要起草人： 赵泉胜、铁英、白玉娥、彭鹏、刘洋、田菊。 4.5 器具消毒灭菌 蒙桑组织培养育苗技术规程 1 范围 本标准规定了蒙桑(Morus mongolica)组织培养育苗的术语和定义、环境及器具灭菌、培养基配 制、外植体选取及灭菌、初代培养、继代培养、生根培养、炼苗与培养、病虫害防治等基本内容及技术 要求。 本标准适用于利用蒙桑组织培养技术生产苗木。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件， 其最新版本(包括所有的修改单) 适用于本文件。 LY/T 1882-2010 林木组织培养育苗技术规程 3 术语和定义 LY/T 1882-2010界定的术语和定义适用于本文件。 4 环境及器具灭菌 4.1 准备室消毒灭菌 经常用消毒液消毒， 保持室内清洁。 4.2 接种室消毒灭菌 保持室内清洁。接种前用紫外灯照射30 min~40 min，关闭紫外灯20 min后方可进入。 4.3 培养室消毒灭菌 经常用消毒液对地面、组培架等设施进行消毒。 4.4 超净工作台消毒灭菌 接种前应用紫外灯照射30 min~40 min，打开无菌风吹40 min以上；然后用70%酒精棉擦拭台面。 定期清洗超净工作台的过滤膜， 具体方法： 摘下滤膜， 使用流水冲洗干净， 晾干， 安装， 紫外灯照射灭 菌。 4.5.1 接种器具消毒灭菌 接种前，将接种工具用滤纸包好，置于高压灭菌锅灭菌， 要求温度121 ℃、时间30 min。使用前用 酒精灯外焰灼烧20 s以上，或用接种工具灭菌器直接灭菌。 4.5.2 污染瓶消毒灭菌 用高压灭菌锅消毒， 然后再用自来水清洗培养瓶。 5 培养基配制 5.1 基本培养基选择 选择MS培养基为基本培养基。 5.2 母液配制和保存 5.2.1 母液的配制 MS培养基母液配制成几种化合物的混合母液，A液配制成20倍母液，B、C液配制成100倍母液， D液 配制成200倍母液， E液配制成50倍母液， 具体参数参见附录A。 植物生长调节物质配制浓度为1.0 mg/mL。 5.2.2 母液的保存 母液配制好后， 贴上标签，注明溶液名称、配制时间、配制者， 置于4 ℃冰箱存放。每瓶试剂使用 前应目测无结晶、无异色才能使用。 5.3 培养基制备 5.3.1 准备 根据培养基成分准备好蒸馏水、蔗糖、琼脂和各类母液等试剂药品， 烧杯、容量瓶、移液枪、量筒、 天平、药匙、磁力搅拌器、pH计等器具。 5.3.2 琼脂融化 先加蒸馏水700 mL/L左右，再加入5.5 g/L~6.0 g/L琼脂，加热搅拌使琼脂融化。 5.3.3 糖溶解 琼脂融化后，初代和生根培养基加蔗糖20 g/L，继代培养基加30 g/L蔗糖， 搅拌使糖溶解。 5.3.4 加母液 配制初代和继代培养基时，用量筒取A液母液、B液母液、C液母液、D液母液、E液母液分别为50ml/L、 10 ml/L、5 ml/L、5 ml/L、10 ml/L，混合均匀备用。 配制生根培养基时， A液母液、 B液母液、 C液母液、 D液母液、E液母液分别为25ml/L、10 ml/L、5 ml/L、5 ml/L、10 ml/L，混合均匀备用。 初代培养基母液混合液中添加 IBA 0.5 mg /L和 6-BA 1.0 mg /L。 增殖继代培养基母液混合液中添加 IBA 0.5 mg /L和 GA3 0.5 mg /L。 生根培养基母液