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免疫组织化学;免 疫 组 织 化 学 Immunohistochemistry (IHC);第一章 免疫组织化学基本原理 及相关知识; 用标记的抗体（或抗原）对细胞或组织内的相应抗原（或抗体）进行定性、定位或定量检测，经过组织化学的显色反应之后，用显微镜、荧光显微镜或电镜观察。 ;;蛋白质 磷脂 多肽 多糖 核酸 受体 酶 病原体 激素;免疫组织化学技术的突出优点： ● 高度的特异性 ● 敏感性高 ● 方法步骤统一 ● 机能和代谢密切结合， 定性、定位、定量的统一 ; 免疫组织化学技术在细胞、染色体或亚细胞水平原位检测抗原分子，是其它任何生物技术难以达到和代替的。它能在细胞、基因和分子水平同时原位显示基因及其表达产物，形成了新的检测系统，为生物学、医学和各个领域分子水平的研究与诊断，开拓了广阔的前景。;● 基因探针 ● 核酸分子杂交技术 ● 原位PCR技术 ● 核酸杂交和免疫组织化学双标记 ● 电镜杂交技术;核酸分子探针-杂交-免疫组织化学 放大和显示杂交信号 杂交免疫组织化学;基因重组技术 免疫组织化学 图像分析 单抗技术 技 术 流式细胞术 激光共聚焦显微术;免疫组织化学的全过程： 抗原的提取和纯化 免疫动物或细胞融合（单克隆抗体） 抗体效价检测和提取、纯化 标记抗体 细胞、组织切片标本的制备 免疫组织化学反应和显色 观察和记录结果;第二章 免疫组织化学中的技术问题;技术问题的重要性;第一节 有关的细胞和组织学技术;一、取材 （一）细胞标本的取材 ● 印片法 ● 穿刺吸取涂片法 ● 体液沉淀涂片法 细胞数量多：直接涂片 细胞数量少：离心沉淀涂片;● 培养细胞 直接收集 培养液离心涂片;（二）组织标本的取材 ◆ 活检钳的刀口必须锋利，以免组织受挤压 ◆ 取材部位必须是主要病变区 ◆ 必须取病灶与正常组织交界处 ◆ 必要时取远离病灶区的正常组织作对照;新鲜组织 ? ???冻切片 ? 液氮保存 ? -70℃冰箱 ;二、固定 固定剂：常用醛类固定剂 ◎ 10%福尔马林（甲醛10ml + 蒸馏水90ml） ◎ 10%中性缓冲福尔马林（甲醛10ml + 0.01mol/L pH7.4 PBS 90ml ） ◎ 2.5%戊二醛 用于电镜 ◎ 丙酮 用于冰冻切片、细胞涂片 4℃;固定方法： ▲ 浸入法 ▲ 灌注法;三、切片 1. 石蜡切片 2. 冰冻切片 3. 塑料切片 4. 超薄切片 ; 四. 玻片处理和涂胶 载玻片和盖玻片处理 盖玻片、载玻片 清洁液中浸泡24h（硫酸 + 重铬酸钾） 清水冲洗 蒸馏水冲洗 95%酒精浸泡24h 烘干 ;;第二节 免疫组化染色中的技术问题 ;一、抗体 新制备或购进的是原液或冻干品，抗血清为全血清，单克隆抗体是培养上清或腹水。 ; 1. 抗体贮存 2. 抗体稀释 按不同的免疫染色方法和抗原性强弱及抗原的多少，稀释各种抗体原液，以便获得最佳免疫染色效果。;◆ 抗体最佳稀释度的测定方法 ———————————————————————— 二抗 一 抗 1 1:50 1:100 1:200 1:400 ________________________________