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列举乳鼠肺组织细胞原代培养的操作过程
1 制备细胞培养基
准备一瓶无菌的培养液,如RPMI-1640培养基,并加入必要的营养成分和特殊需求的物质,如钙、磷等,然后在35-37℃的恒温箱内反复震荡。
2 细胞获取
从乳鼠肺组织中收集少量肺细胞,用分离液进行处理,将肺细胞悬浮在培养液中,采用洗涤、打散法将细胞均匀地悬浮到培养液中。
3 细胞转移
用10ml的细胞转移液将其移植到100mm的培养皿中,将其注入培养皿,接着在培养皿内搅拌,使细胞分散成单个细胞。
4 培养
将细胞悬浮液放入37℃,5% CO2 条件下培养箱内,调整pH值为7.2-7.4的培养箱,培养时间通常为24-48小时,定期检查细胞的生长状态。
5 收获有目的性细胞培养
根据使用的培养基的细胞应用,选择有目的性的细胞收获方法,如对于糖代谢实验,可采用0.25% trypsin溶液处理,将培养箱内的细胞分散,后可进行实验研究。
6 细胞储存
在?80℃的液氮冷冻库中储存细胞,并定期进行检测,以维持细胞活力和重复使用。
以上是乳鼠肺组织原代细胞培养的操作过程。严格按照步骤完成,可以得到对细胞结构、功能等参数的观察和分析,为研究细胞提供重要的实验条件。
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