第二章基因工程制药新版4.ppt

[A]、定义 是指产生的蛋白质同时含有细菌蛋白+目的蛋白。 融合蛋白的氨基酸端由大肠杆菌原核基因编码、而羧基端则由真核基因编码。 最终表达出来的蛋白质=1条原核多肽+1条真核多肽，称为融合蛋白。  [B]、优缺点 优点：（1）蛋白质在细菌体内比较稳定，不易被细菌的酶类所降解，（2）容易实现高效表达，（3）基因操作简便。 缺点：由于蛋白质中含有细菌蛋白，会影响真核蛋白的免疫原性，只能用作抗原,不能作为人体注射用药。 [C]、改进措施 （1）在细菌蛋白和目的蛋白间加入Ile-Glu-Gly-Arg，可被人体内的凝血因子Xa识别而切开。在体外，采用特异的蛋白酶（凝血因子X、胶原酶、肠激肽酶）对融合蛋白进行降解。 （2）在细菌蛋白和目的蛋白间加入Met，CNBr可专一性识别Met并切开，形成原核多肽+真核蛋白质分子，从而获得具有生物活性的天然真核蛋白质分子。 [D]、融合蛋白的具体表达方式 融合基因----融合蛋白 基因结构为“原核启动子—原核SD序列—原核结构基因片段—真核结构基因序列—原核终止密码子” （D1）融合表达载体的构建 （D2）常用的融合蛋白（原核细菌表达的蛋白质） （D3）融合蛋白的切除方法 关键： 融合蛋白与外源蛋白的阅读框要对齐 两个蛋白的结合位点的设计很重要，应便于下一步切除融合蛋白的操作。 （D1）融合表达载体的构建 （D2）常用