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专题 基因工程;目 录;期末成绩;专题1 基因工程;基因工程的诞生过程;;基因工程的诞生过程;;大鼠的生长激素基因及其调控区;1998年，加拿大的一个研究小组展示了一只能在荧光下变绿的小鼠。这种小鼠被做了遗传改造，携带了一个水母绿色荧光蛋白基因。荧光鼠已被用来研究胚的生长和细胞内蛋白的运动。 ;基因转移载体;;噬菌体载体 酵母人工染色体 动物病毒DNA改造的载体 （如腺病毒，腺病毒相关病毒，逆转录病毒）;分布：;;黏性末端和平末端;识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开。(6个,4、5、8个);第一个字母取自产生该酶的细菌属名，用大写； 第二、第三个字母是该细菌的种名，用小写； 第四个字母代表株； 用罗马数字表示发现的先后次序。; 切割外源DNA，保护自身。 含有某种限制酶的细胞，其DNA分子中或者不具备这种限制酶的识别序列，或者通过甲基化酶将甲基转移到所识别序列的碱基上，使限制酶不能将其切开。;要想获得某个目的基因必须要用限制酶切几个切口？可产生几个黏性末端？一个目的基因有几个黏性末端？;1、种类： 2、作用部位：;; Bt毒蛋白基因;;1、目的基因主要是指编码蛋白质的结构基因。; 将含有某种生物不同基因的许多DNA片断，导入到受体菌的群体中，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因，称为基因文库。;文库构建步骤;;2.从基因文库中获取目的基因;②反转录法：;第31页/共113页;③根据已知的氨基酸序列合成DNA法 ：;;(二)利用PCR技术扩增目的基因;;; 模板DNA 特异性引物 耐热DNA聚合酶 dNTPs;3. PCR的基本反应步骤;第39页/共113页;① 概念：PCR全称为聚合酶链式反应，是一项在生物体外复制特定DNA片段的核酸合成技术； ② 原理：DNA复制； ③ 条件：已知基因的核苷酸序列、四种脱氧核苷酸、一对引物、DNA聚合酶。 ④ 方式：以指数方式扩增，即2n（n为扩增循环的次数） ⑤结果：使目的基因的片段在短时间内成百万倍地扩增;⑥ 过程： a、DNA变性（90℃-95℃）：双链DNA模板在热作用下，氢键断裂，形成单链DNA； b、退火（复性55℃-65℃）：系统温度降低，引物与DNA模板结合，形成局部双链。 c、延伸（70℃-75℃）：在Taq酶的作用下，从引物的5′端→3′端延伸，合成与模板互补的DNA链。;历史不能忘记中国科学家对PCR的贡献—钱嘉韵;;基因表达载体的组成：;转化 ——;1、导入植物细胞：农杆菌转化法;1、导入植物细胞：农杆菌转化法;（1）方法：显微注射法 （2）程序：;3、将目的基因导入微生物细胞;;目的基因的检测示意图;放射自显影照片;基因操作的基本步骤;基因工程与医药卫生;基因工程与医药卫生;抗生素史话;1944年，瓦克斯曼（Selman Abraham Waksman, 1888-1973）在灰色链霉菌中发现链霉素（streptomycin），由于链霉素是当时第一个能够有效治疗肺结核的药物，瓦克斯曼因而获得1952年的诺贝尔生理学奖。 他的成功，再一次引起全世界科学家对利用微生物生产抗生素的研究热潮。 ;人们找到6000多种抗生素 广泛应用的抗生素大约200种 全世界每年抗生素产量超过1.0X108kg 产值约100亿美元;抗生素的分类;抗生素的作用机制;抗生素的不良反应;抗生素的不良反应;抗生素的不良反应;五、抗生素的不良反应;;合理使用抗生素;基因工程与医药卫生;;基因诊断;基因芯片（gene chip），又称DNA微阵列（DNA microarray）或DNA芯片。 是一块带有DNA微阵列涂层的特殊玻璃片，在数平方厘米的面积上安装数千或数万个核酸探针，经由一次测验，即可提供大量基因序列相关资讯。 它是基因组学和遗传学研究的工具。研究人员应用基因芯片就可以在同一时间定量分析成千上万个基因表达的水平，具有快速、精确、低成本的生物分析检验能力。 ;Two color - DNA microarray;第72页/共113页;Can place 20,000 gene pieces in a small space at one time;基因治疗;体外基因治疗 ; 美国医学家W·F·安德森等人对腺苷脱氨酶缺乏症（ADA缺乏症）的基因治疗，是世界上第一个基因治疗成功的范例。;基因治疗对癌症的治疗方案;人体的器官移植;罗纳德·赫里克和理查德·赫里克;1963年，美国的医学家进行人类历史上的第一例肝移植 1963年，美国另一位医生做了第一例肺移植 1967年，南非完成了第一例心脏移植（存活18天） 1968年，美国几位科学家又进行了第一例心肺联合移植 截止到2003年底全球器官移植已突破