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免疫学检测技术;一、免疫学检验原理;1.特异性和交叉反应 特异性：一种抗原通常仅能与由它刺激所产生的抗体结合。 分子基础：抗原表位与抗体分子高变区之间空间构型的互补性。 ;交叉反应（cross reaction）性：若两种抗原分子有一个或数个相同（或相似）的决定基，则针对一种抗原的抗血清可与另一种抗原发生反应。; 结合价： 天然抗原分子表面一般含多种抗原决定基，可与多个抗体分子结合，为多价。单体形式的抗体分子有两个Fab段，能结合两个相同的抗原决定基，为两价。 　　;比例合适： 若抗原、抗体的数量比例合适，抗体分子的两个Fab段分别与两个抗原决定基结合，相互交叉连接成网格状复合体，则反应体系中基本不存在游离的抗原或抗体，此时形成肉眼可见的反应物（沉淀物或凝集物）。 因此，确定反应体系中抗原、抗体的最适比例十分重要。 前带现象（prozone）和后带现象(postzone) Ab过剩和Ag过剩　;前带现象（prozone）和后带现象(postzone) Ab过剩和Ag过剩　;; 抗原-抗体反应为分子表面的非共价结合，结合虽稳定但可逆。在一定条件下（如低pH、高浓度盐、冻融等），抗原-抗体复合物可被解离。解离后的抗原和抗体仍保持原有理化特性和生物学活性。 根据此特点，可借助亲和层析法纯化抗原或抗体。;4.阶段性;1.电解质 抗原和抗体有对应的极性基团，能相互吸附并由亲水性变为疏水性。电解质的存在使抗原-抗体复合物失去电荷而凝聚，出现可见反应，故免疫学试验中多用生理盐水稀释抗原或抗体。;2.酸碱度 抗原抗体反应的最适pH是6-8。 3.温度 最适温度为37℃。有些例外，如冷凝集素在 4℃左右与红细胞结合最好，20℃以上反而解离。; 4.抗原和抗体的性质 抗体的特异性和亲和力是决定抗原-抗体反应的关键因素。 此外，抗原理化性质、抗原决定基多寡和种类等均可影响抗原-抗体反应。 ;抗体分子上一个抗原结合点与对应的抗原决定基之间的结合能力; 根据抗原的性质、结合反应的现象、参与反应的成分等因素分类： 1.凝集反应 2.沉淀反应 3.补体参加的反应 4.免疫标记技术;?; 颗粒性抗原（细菌或细胞等）与???应抗体结合，在一定条件下，出现肉眼可见的凝集物，称为凝集反应(agglutination) 。 用于凝集反应中的抗原称凝集原(agglutinogen)。 用于凝集反应中的抗体称凝集素（agglutinin)。 ;1．直接凝集（direct agglutination) ： 细菌或红细胞与相应抗体直接反应，可出现细菌或红细胞凝集现象。 2．间接凝集（indirect or passive agglutination) ： 检测针 对可溶性Ag的Ab 3．间接凝集抑制试验 (direct agglutination inhibition test) 4. 协同凝集试验（co-agglutination test） 载体为金葡菌，其细胞壁蛋白A与IgG 的Fc结合，用于细菌、病毒的快速检测。;第19页/共107页;妊娠免疫诊断试验 ;Definition:可溶性抗原（血清蛋白、外毒素、细菌滤液等）与相应抗体结合，在一定条件下，形成出现肉眼可见的沉淀物的现象称为沉淀反应。 ;大多沉淀反应多用半固体琼脂凝胶作为介质进行琼脂扩散或免疫扩散，即可溶性抗原与抗体在凝胶中扩散，在比例合适处相遇即形成可见的白色沉淀。;1．单向免疫扩散(single immunodiffusion) 2．双向免疫扩散(double immunodiffusion) ;单向免疫扩散(Single Immunodiffusion);双向免疫扩散 （Double Immunodiffusion);第26页/共107页;补体结合试验 （Complement Fixation test, CFT);补体结合试验(complement fixation test，CFT ) 将免疫溶血作为指示系统，用以检测另一反应 系统中抗原或抗体的传统方法。;试验原理;反应分两步进行 第一步:反应系统与补体的作用 第二步:指示系统利用剩余补体的反应;已知抗原加入血清（检测抗体）; 用荧光素、酶、放射性核素或化学发光物质等标记抗体或抗原，进行抗原-抗体反应的检测，是目前应用最为广泛的免疫学检测技术。标记物与抗体或抗原连接后并不改变抗原抗体的免疫特性，具有灵敏度高、快速、可定性、定量、定位等优点。; 用荧光素与抗体连接成荧光抗体，再与待检标本中抗原反应，置荧光显微镜下观察，抗原-抗体复合物散发荧光，