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氨基酸纸色谱第1页/共13页第2页/共13页第1页/共12页【实验目的】 1．掌握纸色谱的操作方法。 2．了解纸色谱的基本原理。第3页/共13页第2页/共12页【实验原理】 色谱又可称层析，是一种分离混合物的物理方法。其分离原理是混合物中各组分在两相之间溶解能力、吸附能力或其它亲和作用的差别，使其在两相中分配系数不同，当两相做相对运动时，组分在两相间进行连续多次分配，使各组分达到彼此分离。其中一相是不动的称为固定相，另一相是携带混合物流过此固定相的流体称为流动相。 第3页/共12页第4页/共13页 当流动相所含混合物经过固定相时，由于各组分在性质和结构上有差异，与固定相发生作用的大小、强弱也有差异，换言之，在相同流动相下，不同组分在固定相中的滞留时间有长有短，从而按先后不同的次序从固定相中流出。这种借助在两相间分配差异而使混合物中各组分分离的技术方法，称为色谱法。第4页/共12页第5页/共13页 纸色谱是以滤纸为载体，固定相是滤纸纤维上吸附的水分；流动相(通常称为展开剂)一般是指与水相混溶的有机溶剂，样品在固定相水与流动相展开剂之间连续抽提，依靠溶质在两相间的分配系数不同而达到分离的目的。第5页/共12页第6页/共13页 氨基酸是无色的化合物，可与茚三酮反应产生颜色，因此，溶剂自滤纸挥发后，喷上茚三酮溶液后加热，可形成色斑而确定其位置。第7页/共13页第6页/共12页【实验步骤】1．点样 取16cm×6cm的中速色谱滤纸在距离底边2cm处用铅笔划起始线，在起点线上分别点上标准品及混合样品溶液（样点间距1cm），点样直径控制在2mm～4mm，然后将其晾干或在红外灯下烘干。第7页/共12页第8页/共13页 2．展开 向色谱缸中加25mL展开剂，盖上盖子约5min（使缸内展开剂蒸气饱和），将点样后的滤纸悬挂在缸内（图4-2）使纸底边浸入展开剂约0.3cm～0.5cm，待溶剂前沿展开到合适部位（约8cm～10cm），取出，划出前沿线， 第9页/共13页第8页/共12页第9页/共12页第10页/共13页 3．显色 将展开完毕的滤纸，用电吹风吹干，使展开剂挥发。然后，喷上0.5％的茚三酮溶液，再用电吹风热风吹干，即出现氨基酸的色斑。第10页/共12页第11页/共13页 4．计算Rf值 分别计算丙氨酸、亮氨酸及未知溶液中各成分的Rf值。通常用相对比移值Rf表示物质相对距离。Rf值的大小与物质结构、展开剂系统、滤纸种类、温度、pH、时间等有关。在同样条件下，Rf值只与各物质的分配系数有关。因此，用Rf值来进行比较，就可以初步鉴定出混合样品中的不同物质。第12页/共13页第11页/共12页注意事项样点不能过大2. 展开剂液面不能高于起始线第13页/共13页感谢您的欣赏