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- 2023-05-16 发布于内蒙古
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第三章 基因工程第2节 基因工程的基本操作程序
基因表达载体的构建将目的基因导入受体细胞目的基因的检测与鉴定操作程的基因的筛选与获取
01目的基因导入受体细胞
植物细胞动物细胞微生物细胞农杆菌转化法(常用)花粉管通道法—— 显微注射法—— Ca2+处理法目的基因导入
花粉管通道法(开花植物)①用微量注射器将含目的基因的DNA溶液直接注入子房中②在植物受粉后的一定时间内,剪去柱头,将DNA溶液滴加在花柱切面上,使目的基因借助花粉管通道进入胚囊
农杆菌转化法转化:特点:T-DNA的特点:目的基因插入位置:
农杆菌转化法目的基因Ti质粒表达载体农杆菌植物细胞植物细胞染色体DNA新性状植株构建转入导入插入表达
两次拼接: ① 第一次拼接是将目的基因拼接到Ti质粒的T-DNA上 ② 第二次拼接(非人工操作)指被插入目的基因的T--DNA 拼接到受体细胞的染色体DNA上两次导入: ① 将含有目的基因的Ti质粒导入农杆菌 ② 含目的基因的T-DNA导入受体细胞(非人工操作)
显微注射法受体细胞:原因:受精卵① 体积大,易操作② 易表现出全能性构建基因表达载体并提纯利用显微注射将基因表达载体注入动物的受精卵中早期胚胎培养胚胎移植获得具有新性状的动物
目的基因导入微生物细胞(1)常用方法:Ca2+处理 目的:使细胞处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状
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