上课基因工程及其应用.pptxVIP

上课基因工程及其应用第1页/共54页 能产生人胰岛素的大肠杆菌第2页/共54页 第二节《基因工程及其应用》第3页/共54页 一、基因工程的原理基因工程，又叫做基因拼接技术或DNA重组技术。通俗的说，就是按照人们的意愿，把一种生物的某种基因提取出来，加以修饰改造，然后放到另一种生物的细胞里，定向地改造生物的遗传性状。第4页/共54页 培育转基因大肠杆菌的简要过程：实例展示目的基因供体细胞受体细胞获得新性状（人的细胞）（大肠杆菌）第5页/共54页 DNA重组技术的基本工具准确切割DNA的工具（基因“剪刀”） ——限制性内切酶DNA片段的连接工具（基因“针线”） ——DNA连接酶基因转移工具（基因“运载体”） ——基因进入受体细胞的运载体　　基因的大小以纳米计算，要对它进行剪切、拼接等操作，最少需要以下三种专门工具：第6页/共54页 1、基因的指“ 限制性核酸内切酶 ”一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列,并在特定切点切割特点:“ ”这个特点说明了：酶具有专一性第7页/共54页 1、“基因剪刀”——限制性核酸内切酶(限制酶)C T T A AG A A T T C G例如:EcoRI限制酶，专一识别GAATTC序列，并在G和A之间将序列切开。第8页/共54页 什么叫黏性末端？ 被限制酶切开的DNA两条单链的切口,带有几个伸出的核苷酸，他们之间正好互补配对，这样的切口叫黏性末端。第9页/共54页 G A A T T C C T TA A G C C C G G G G G G C C C C T T A A G A A T T C G 黏性末端平末端限制性核酸内切酶能识别特定的核苷酸序列：限制酶EcoRIC C CG G G G G G C C C 限制酶SmaI第10页/共54页 限制性核酸内切酶作用的是DNA分子中的什么键？磷酸二酯键即脱氧核糖、磷酸之间的连接ATGGCATCTTCGAA GP AP第11页/共54页 尝试写出下列序列受EcoRI限制酶作用后的黏性末端　　DNA被限制酶切断后有两个反向互补的“黏性末端”。被同一种限制酶切断的几个DNA具有相同的黏性末端，碱基能够通过互补进行配对。CTTCATGGAAGTACTTAAGGGATT AATTCCCTAA ACGTGCTTAAAATTCCCATT GGGTAA GGCATCTTAAAATTCCGTAG GGCATCTTAAAATTCCGTAG 目的基因第12页/共54页 限制性内切酶（EcoRⅠ）作用过程点击播放第13页/共54页 一、基因工程的原理2、“基因针线”——DNA连接酶　　连接酶的作用：将脱氧核糖和磷酸交替连接的DNA骨架的缺口“缝合”。CTTCATGGAAGTACTTAAGGGATT AATTCCCTAA GGCATCTTAAAATTCCGTAG 连接酶连接的部位： 生成磷酸二酯键第14页/共54页 AATTGCCTTAAG连接磷酸二酯键第15页/共54页 不同点： 连接酶：将DNA片段间互补配对的两个黏性末 端连接起来，使之成为一个完整的DNA分子。DNA聚合酶和DNA连接酶有何异同点？聚合酶：以一条DNA为模板，将一个一个核苷酸 连接起来相同点：都是通过形成磷酸二酯键连接起来思考：如何将重组DNA分子送入受体细胞呢？第16页/共54页 DNA连接酶的作用过程点击播放第17页/共54页 3、基因工程的目的基因A、常用的运载体：质粒、噬菌体和动、植物病毒等第18页/共54页 质粒存在于许多细菌和酵母菌等生物中,是拟核或细胞核外能够自主复制的很小的环状DNA分子.　第19页/共54页 用同种限制性内切酶切断的质粒目的基因导入细胞内第20页/共54页 运载体特点：1能够在宿主细胞内复制并稳定保存；２具有多个限制酶切点以便与外源基因相连；３具有标志基因，便于进行筛选．第21页/共54页 第22页/共54页 三、基因工程基本步骤1、提取目的基因2、目的基因与运载体结合第23页/共54页 3、将目的基因导入受体细胞导入扩增4、目的基因的监测与鉴定第24页/共54页 目的基因的检测与鉴定　　大量的受体细胞接受不多的目的基因。处理的受体细胞中真正摄入了目的基因的很少，必须将它从中检测出来。 将每个受体细胞单独培养形成菌落，检测菌落中是否有