流式细胞术在白血病中的应用.pptxVIP

流式细胞术在白血病中的应用第1页/共53页 流式细胞术在白血病/淋巴瘤分型和监测中的应用第2页/共53页 3世界卫生组织血液肿瘤分类方案（1999年）“新分类方案的基本原则是：结合形态学、免疫表型、遗传改变和临床特征来鉴定疾病的‘真实’本质”。“这为世界各国肿瘤学家和病理学家提供了一个全新的与令人兴奋的合作交流新篇章，必将极大促进人们对血液肿瘤的治疗与认识。”（美国临床肿瘤协会，临床肿瘤杂志 17卷3835-3849页，1999年）更重要的是提供了疾病分类与治疗选择和预后判断的较明确关联性，开启了血液肿瘤靶向性治疗和个性化方案的新时代。第3页/共53页 4白血病分子诊断的意义系统诊断白血病初发异常标记精确诊断准确预后指导治疗科研资料残留监测靶向治疗免疫/遗传学靶标MICM诊断第4页/共53页 5WHO血液肿瘤新分类实验技术平台 实施WHO血液肿瘤新分类方案高度依赖流式细胞、细胞遗传和分子生物学实验技术平台以及掌握这类实验技能并具有专业知识的人员。第5页/共53页 6第6页/共53页 7Investigative Tools for MM diagnosis and Management(2008 ASH Education Program Book p298) Patient Evaluation 诊断 单克隆蛋白数量和特征 血清蛋白电泳和免疫球蛋白定量 24小时尿蛋白；总蛋白；本周蛋白 尿和血清免疫固定 血清自由轻链和比例 骨髓检查和骨髓活检Bone marrow aspiration and biopsy 组化 免疫分型-克隆检定，及通过CD38/CD56/CD19/CD45抗体组合能从90余 例患者正常浆细胞中找到检测残留MM细胞 终末器官损害评价 全血细胞计数；生化检查: 血清肌酐和骨钙测定 预后评估 球蛋白，betta-2微球蛋白, LDH, CRP 骨髓细胞遗传学和FISH t(4;14), t(14;16), del 17p 针对某些特定患者的特殊研究 第7页/共53页 8传统流式细胞术的临床应用细胞计数：CD4、CD34DNA含量：多倍数、S期结果是数据、准确性依赖于良好的质控传统流式细胞术在白血病免疫表型中的应用单参“白血病表型”，阳性比率大多数细胞为肿瘤细胞多为形态学/细胞化学后的确认数据由临床医师判断高分辨流式细胞的优点以多参数正常抗原表达为基础结果类似病理报告用于原发性诊断与鉴别诊断用于疾病分期，治疗选择疗效监测，预后判断流式细胞术第8页/共53页 9骨髓-异质性系统中的应用多系列 Lymphocyte (T, B, NK) Monocyte Neutrophil Eosinophil Basophil Erythrocyte骨髓中各系列细胞处于连续性成熟阶段必须能涵盖所有细胞第9页/共53页 10应该使用何种抗体？所有抗体必须为标准的商业化试剂没有什么“秘密武器”或者专门特异的抗体抗体的联合应用能使你从有限的标本中得到最大化的信息量对正常抗原表达的正确认识能帮助你有效地鉴别疾病状态相关的改变第10页/共53页 11高 分 辨 流 式 细 胞 术 能 够 鉴 别 和 分 类 所 有 骨 髓 细 胞可 以 对 每 一 个 细 胞 进 行 多 特 征 性 的 检 测 并 对 其 相 应 的 系 列 和 成 熟 的 阶 段 进 行 分 类 至 少 检 测 一 万 个 细 胞， 分 辨 率 达 到 0.5 %第11页/共53页 12第12页/共53页 13CD45/SSWood (2004) Methods Cell Biology 75:559-576第13页/共53页 14正常粒系成熟模式第14页/共53页 正常 B 系成熟Wood (2004) Methods Cell Biology 75:559-576第15页/共53页 16表达交叉系列的抗原非同步抗原共表达：CD34与CD15、CD11b、CD56、CD14抗原的过度表达：早前B-ALL中CD10抗原表达缺失：泛T抗原易位抗原表达：CSF中TdT+淋巴细胞，骨髓中胸腺发育阶段的T淋巴细胞光散射异常：FSC和SSC白血病相关的免疫表型特点第16页/共53页 17AML-M0第17页/共53页 18AML-M2第18页/共53页 19AML-M3第19页/共53页 20AML-M4第20页/共53页 21AML-M5第21页/共53页 22B-ALL第22页/共53页 23Burkitt淋巴瘤/白血病成熟B-ALL第23页/共53页