DB6111T 172-2021猕猴桃病毒鉴定技术规程.docxVIP

ICS 65.020 CCS B 16 DB6111 杨 凌 农 业 高 新 技 术 产 业 示 范 区 地 方 标 准 DB 6111/T 172—2021 猕猴桃病毒鉴定技术规程 Technical standard for virus identification in kiwifruit seedlings 2021 - 10 - 22 发布 2021 - 11 - 01 实施 杨凌 示 范 区 市场监 督 管理局 发 布 I DB6111/T 172—2021 前 言 本文件按照GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》起草。 本文件由西北农林科技大学提出。 本文件由杨凌示范区农业标准化技术委员会归口。 本文件起草单位：西北农林科技大学、陕西省农村科技开发中心。 本文件起草人：赵 磊、徐 明、刘 佩、吴云锋、雷玉山。 本文件由西北农林科技大学和陕西省农村科技开发中心负责解释。 联 系 人：赵磊 联系方式联系地址：杨凌示范区邰城路3号 1 DB6111/T 172—2021 猕猴桃病毒鉴定技术规程 1 范围 本文件规定了猕猴桃病毒鉴定技术的术语和定义、检测对象、取样部位、抽样、鉴定方法和判定规 则。 本文件适用于杨凌示范区猕猴桃母本树、猕猴桃苗木的病毒鉴定。环境相似的猕猴桃产区可参照执 行。 2 规范性引用文件 本文件没有规范性引用文件。 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 猕猴桃母本树 stock plant of kiwifruit 提供猕猴桃种条或建外植体所需要幼嫩枝条的猕猴桃母株。 3.2 猕猴桃苗木 Kiwifruit seedl ing 经扦插、嫁接、组培等方式繁育的猕猴桃种苗。 3.3 逆转录-聚合酶链式反应 Reverse transcription-polymerase chain react ion (RT-PCR) 提取猕猴桃检材的总RNA ， 以其中的mRNA为模板，利用逆转录酶反转录成cDNA ，再以cDNA为 模板进行聚合酶链式反应。 4 检测对象 猕猴桃主要病毒： a) 猕猴桃病毒 A (Actinidia virus A, AcVA) ； b) 猕猴桃病毒 B (Actinidia virus B，AcVB) ； c) 猕猴桃病毒 C (Actinidia virus C，AcVC) ； d) 猕猴桃褪绿环斑相关病毒 (Actinidia chlorotic ringspot-associated virus, AcCRaV) ； 2 DB6111/T 172—2021 e) 黄瓜花叶病毒 (cucumber mosaic virus, CMV) ； f) 苹果茎沟病毒 (apple stem grooving virus, ASGV) ； g) 马铃薯 X 病毒 (potato virus X, PVX) ； h) 柑橘叶斑驳病毒 (citrus leaf blotch virus，CLBV) ； i) 猕猴桃病毒 1 (Actinidia virus 1，AcV-1) ； j) 猕猴桃褪绿环斑病毒(Actinidia yellowing ringspot virus, AYRSpV) ； k) 猕猴桃黄化病毒 1 (Actinidia yellowing virus 1, AcYV1) ； l) 猕猴桃黄化病毒 2 (Actinidia yellowing virus 2, AcYV2) ； m) 猕猴桃种传潜隐病毒 (Actinidia seed-borne latent virus, ASbLV)。 4.1 抽样 4.1.1 猴桃母本树 每株均需检测。 4.1.2 出圃苗木 采用5点取样法随机抽取。1万株以内抽检100株 (含1万株) ；1万株~10万株 (含10万株) ，首个1 万株抽100株，之后每增加1万株增检50株，不足1万株按1万株计；超过10万株，第1万~10万株按上述 方法抽样，之后每增加1万株增检20株，不足1万株按1万株计。 5 取样部位 生长季节取幼嫩叶片放置于自封袋内，4 ℃保存不超过24 h或放置于-80 ℃长期保存备用；休眠季 节剪下枝条，撕开表皮用小刀刮取1 g左右韧皮部组织，立即使用或放置于-80 ℃保存备用。 6 鉴定方法 6.1 双抗体夹心酶联免疫法 (DAS-ELISA 法) 详见附录A。 6.2 逆转录-聚合酶链式反应法 (RT-PCR 法) 详见附录B。 7 判定规则 酶联免疫检测或RT-PCR检测呈阳性反应的判定为携带病毒。脱毒母本树带毒率为0、出圃苗木带毒 率≤3.0%判定为合格