生化技术电泳技术.pptxVIP

生化技术电泳技术;1 电泳：带电粒子在电场中向着与其本身电荷相反的电极移动的过程。 2 电泳技术优点：快速、准确、重现性好 3 电泳方法分类 按电场分：常压（500V，适用大分子）、高压（500V，适用小分子） 支持体分：自由电泳、区带电泳 仪器装置分：水平式、垂直式、悬架式 4 电泳条件：水溶液（缓冲液）、支持物（区带电泳）、电场（电泳仪、电泳槽） ;一 电泳的基本原理;二 纸电泳;2 滤纸的选择与处理 层析用滤纸，纸宽2～3cm/样品组分，长短影响电场强度。 3 点样 点圆点（量少）、点条状（一般），点中间（未知样品）、点一边（已知样品） 干法、湿法 4 电泳 电桥水平、加盖、电压稳定、注意时间 5 显色及分析 蛋白：溴酚兰、氨黑10B、偶氮胭脂红B Aa：茚三酮、靛红 核酸：紫外光下观察 一般洗脱定量 ;三 薄膜电泳;四 薄层电泳;五 凝胶电泳;第9页/共21页;第10页/共21页;1 聚丙烯酰胺凝胶的制备 丙稀酰胺（单体）＋N,N-甲叉双丙稀酰胺（交联剂）→（催化剂） →聚合 催化剂： （1）过硫酸铵＋四甲基乙二胺（TEMED） （2）核黄素（VitB2）＋光 改变单体浓度可改变凝胶孔径 交联剂对孔径有影响：5％最小 根据要分离物质的相对分子质量选择合适的单体浓度。;2 不连续电泳中样品压缩成层的原理 不连续电