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生物技术与工程
知识点1 传统发酵技术的应用与发酵工程及其应用传统发酵技术菌种来源:天然菌种,或上次的面团、卤汁形式:固体发酵及半固体发酵为主,通常是家庭式或作坊式的。特点:一般菌种是多样的,获得的产物一般不是单一的组分
知识点1 传统发酵技术的应用与发酵工程及其应用发酵工程:菌种来源:选育的具有特定功能的纯菌种发酵形式:液体发酵特点:发酵条件人为控制,需经过菌种选育,培养基的配置,灭菌,扩大培养等等。
知识点2 微生物的培养技术及其应用一、微生物的培养基1.概念:人们按照微生物对营养物质的不同需求,配制出供其生长繁殖的营养基质。2.营养成分(1)确定原则:根据微生物的需要。(2)主要营养物质:碳源、氮源、水和无机盐。(3)其他条件:pH、特殊营养(生长因子)和氧气3.培养基种类:(1)液体培养基、固体培养基、半固体培养基(2)选择培养基、鉴别培养基(3)天然培养基、合成培养基4.培养基的制备(1)步骤:计算→称量→溶化(→调pH)→定容→灭菌→倒平板。5.分离某种微生物:例:分离尿素(淀粉)分解菌-----选择培养基(以尿素(淀粉)为唯一氮源(碳源)的选择培养基)鉴定:酚红指示剂----红色(碘液-----透明圈)
知识点2 微生物的培养技术及其应用二、消毒和灭菌项目条件结果常用方法应用范围消毒较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部的部分微生物煮沸消毒法日常用品巴氏消毒法不耐高温的液体(如牛奶)化学药剂消毒法用酒精擦拭双手,用氯气消毒水源灭菌强烈的理化因素杀死物体内外所有的徵生物,包括芽孢和孢子灼烧灭菌法接种工具干热灭菌法玻璃器皿、金属用具高压蒸汽灭菌法培养基及容器
知识点2 微生物的培养技术及其应用三、纯化的两种方法(稀释涂布平板法和平板划线法)项目平板划线法稀释涂布平板法纯化原理通过连续划线操作实现将菌液进行一系列的梯度稀释和涂布平板操作实现注意事项每次划线前后均需灼烧接种环稀释度要足够高菌体获取在具有显著的菌落特征的区域菌落中挑取菌体从适宜稀释度的平板上的菌落中挑取菌体优点可以根据菌落的特点获得某种微生物的单细胞菌落既可以获得单细胞菌落,又能对微生物计数缺点不能对微生物计数操作复杂,需要涂布多个平板
直接计数法(显微镜直接计数法)间接计数法(活菌计数法)原理常利用细菌计数板或血细胞计数板,在显微镜下计算一定体积的样品中微生物的数量当样品的稀释度足够高时,培养基表面生长的单个菌落,来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数就能推测出样品中大约含有多少活菌主要用具显微镜、细菌计数板或血细胞计数板培养基计数依据菌体本身培养基上的菌落数优点计数方便、操作简单计数的是活菌缺点死菌、活菌都计算在内操作较复杂有一定误差计算公式以25×16型血细胞计数板为例,每毫升原液含菌数=400×10000×每小格平均菌体数×稀释倍数每毫升原液含菌数=培养基上平均菌落数目÷涂布平板时所用稀释液的体积(mL)×稀释倍数知识点2 微生物的培养技术及其应用四、计数的两种方法
知识点2 微生物的培养技术及其应用五、两个对照组判断培养基是否被污染------未接种的同种培养基判断是否具有选择作用------接种等量菌液的牛肉膏蛋白胨培养基
知识点3 植物细胞工程一、植物组织培养(原理:植物细胞的全能性)根、芽植物体脱分化再分化培养条件:①无菌②营养物质③适宜环境(温度、PH、光等)④植物激素: 细胞分裂素 生长素遮光一定的光照排列不规则,高度液泡化,呈不定型状态的薄壁细胞愈伤组织离体的植物器官、组织或细胞(外植体)愈伤组织重新分化为芽、根等器官失去特有结构和功能转变成未分化的细胞
知识点3 植物细胞工程二、植物体细胞杂交技术去壁①去壁①融合 ②再生新壁③脱分化④再分化⑤移栽纤维素酶和果胶酶方法:物理方法(电融合法、离心法)化学方法(聚乙二醇融合法、高Ca2+-高pH融合法)意义:克服不同种生物远缘杂交的不亲和性
知识点3 植物细胞工程三、植物细胞工程的应用1.植物繁殖的新途径:微型繁殖:优点是繁殖快,并可保持亲本的优良性状;作物脱毒:利用茎尖组织培养技术获得脱毒苗;人工种子:以植物组织培养得到的胚状体、不定芽、顶芽、腋芽等为材料,经过人工薄膜包装得到的种子。2.作物新品种的培育:单倍体育种和突变体的利用。3.细胞产物的工厂化生产细胞产物种类:蛋白质、药物、香料、生物碱等。技术基础:植物组织培养技术。培养阶段:愈伤组织阶段。
知识点4 动物细胞工程一、动物细胞培养取动物组织用胰蛋白酶、胶原蛋白酶处理分散成单个细胞悬浮生长贴壁生长(大多数)接触抑制传代培养细胞悬液原代培养加培养液在培养皿或培养瓶内分瓶培养培养的条件:无菌、无毒的环境;营养物质(额外添加血清、血浆);温度和pH;气体环境(含95%空气加5%CO2)动物细胞培养技
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