第二章基因工程制药新版7.pptVIP

3.2氨基酸组成及顺序分析 氨基酸组成 水解蛋白质为氨基酸 全自动氨基酸分析仪或高效液相色谱进行测定 顺序分析 质谱法 推定法：从已知基因序列推断蛋白质氨基酸序列 化学法（手工、自动） 水解法 Sanger法、Edman降解法、氨肽酶法 肼解法、羧肽酶法 第三十一页，共七十五页。 各类氨基酸自动测序仪 第三十二页，共七十五页。 （4）重组蛋白质浓度、相对分子量测定 重组蛋白质的浓度测定方法：（1）凯氏定氮法（蛋白质平均含氮量为16﹪，首先测定氮的含量，进而估算蛋白质的含量）（2）双缩脲法（3）Bradford法（4）福林-酚法（5）紫外分光光度法（芳香族氨基酸在280nm附近有最大光吸收，核酸在260nm附近有最大光吸收） 重组蛋白质的相对分子量测定方法：（1）凝胶过滤法 （2）聚丙烯酰胺聚胶电泳法 第三十三页，共七十五页。 电泳法测定未知蛋白的分子量 第三十四页，共七十五页。 （5）蛋白质二硫键分析 二硫键的巯基与蛋白质的生物活性有着密切关系。基因工程产物中-S-S-键是否正确配对为一个重要的问题。 测定方法：（1）对氯汞苯甲酸法（PCMB）（2）5、5-二巯基-双-2-硝基苯甲酸法（DTNB） 第三十五页，共七十五页。 2、纯度分析 目的蛋白质含量测定通常根据目的蛋白质的理化性质、生物学特性来进行测定。 采用的方法有4项：（1