微生物的突变和诱变育种.pptVIP

进一步检出所需缺陷型 逐个检出法 影印培养法 第三十页，共五十七页，2022年，8月28日 一般从菌落大小也可以判断，新长出的菌落较小，即是营养缺陷型 夹层培养法 营养缺陷型的鉴定 获得的营养缺陷型菌株还应进一步确认其生长的所需物。 生长谱法 组合补充培养基法 第三十一页，共五十七页，2022年，8月28日 营养缺陷型的应用 利用营养缺陷型突变株来生产氨基酸和核苷酸是典型的例子 第三十二页，共五十七页，2022年，8月28日 天冬氨酸激酶(AK)被赖氨酸及苏氨酸协同反馈所抑制 通过诱变处理，获得高丝氨酸缺陷型突变菌株，该突变型不能产生苏氨酸。 在限量高丝氨酸的培养基中缺陷型菌株能够正常生长，并且因为消除了反馈抑制 突变型能过量生产L-赖氨酸 第三十三页，共五十七页，2022年，8月28日 抗阻遏和抗反馈突变型 抗阻遏和抗反馈突变型都是由于代谢失调所造成的，在细胞中已经有大量最终代谢产物时仍然继续不断地合成这一产物。 选育结构类似物抗性突变株 结构类似物是指一些和细菌体内氨基酸、嘌呤、维生素等代谢产物结构相类似的物质 主要用于末端产物的积累 第三十四页，共五十七页，2022年，8月28日 抗性突变菌株的筛选 抗生素抗性突变株 在抗生素产生菌选育中，通过筛选抗生素抗性突变可提高抗生素产量。 抗生素抗性突变株除能提高抗生素的产量外，还能提高其它代谢产物的量。 条件抗性突变 因环境不同，能表现为野生型菌株的特性和突变型菌株特性的突变称为条件抗性突变或称为条件致死突变。 温度敏感突变常用于提高代谢产物产量 致死 营养缺陷 第三十五页，共五十七页，2022年，8月28日 抗性突变菌株的筛选方法 一次性筛选法 一次性筛选法就是指在对出发菌株完全致死的环境中，一次性筛选出少量抗性变异株。 噬菌体抗性菌株 耐高温菌株 第三十六页，共五十七页，2022年，8月28日 阶梯性筛选法 梯度平板法 第三十七页，共五十七页，2022年，8月28日 纸片扩散法 用打孔器将较厚的滤纸（如新华六号）打成小圆片，并使纸片吸收一定浓度的药物，经干燥或不经干燥，放入涂布了菌悬液的平板上，一般9厘米的培养皿中等距放置三片为宜。经培养后观察围绕纸片的抑菌圈，抑菌圈内出现的可能就是抗性菌。 组成酶变异株的筛选 诱导酶的生产需要诱导物，而且受到诱导物的种类、数量以及分解产物的影响。能迅速利用的碳源（如葡萄糖）会引起酶合成的减少，诱导物有时又比较昂贵。 生产成本提高 第三十八页，共五十七页，2022年，8月28日 控制酶合成的调节基因发生了变异 诱导酶转变成组成型酶 具体的筛选方法有恒化器法、循环培养法和诱导抑制物法 恒化器法：恒化器常被用于微生物的“驯化”，添加不能起诱导作用的低浓度底物，缓慢生长 循环培养法：利用不含诱导物的培养环境和含有诱导物的培养环境进行交替循环培养待分离的菌悬液，从而使组成酶变异株得到富集。 诱导抑制剂法：加入诱导抑制剂如α-硝基苯基-β-岩藻糖苷阻止某些诱导酶的合成 第三十九页，共五十七页，2022年，8月28日 1、诱变育种的基本环节 第四节 微生物诱变育种 第四十页，共五十七页，2022年，8月28日 第一页，共五十七页，2022年，8月28日 第一节　微生物的突变 一、基因突变（gene mutation） 基因突变简称突变，是变异的一类，泛指细胞内（或病毒粒内）遗传物质的分子结构或数量突然发生的可遗传的变化，可自发或诱导产生。突变的几率一般很低（10-6 ~ 10-9） 　　 从自然界分离到的菌株一般称野生型菌株（wild type strain），简称野生型。野生型经突变后形成的带有新性状的菌株，称突变株（mutant，或突变体、突变型）。 第二页，共五十七页，2022年，8月28日 　　 凡能用选择性培养基（或其他选择性培养条件）快速选择出来的突变株称选择性突变株（selectable mutant），反之则称为非选择性突变株。 （一）突变类型 第三页，共五十七页，2022年，8月28日 1、营养缺陷型（auxotroph） 某一野生菌株因发生基因突变而丧失合成一种或几种生长因子、碱基或氨基酸的能力，因而无法再在基本培养基上正常生长繁殖的变异类型。 2、抗性突变型（resistant mutant） 　　 指野生型菌株因发生基因突变，而产生的对某化学药物或致死物理因子的抗性突变类型。 3、条件致死突变型(conditional lethal mutant) 　　 某菌株或病毒经基因突变后，在某种条件下可正常地生长、繁殖并呈现其固有的表型，而在另一种条件下却无法生长、繁殖的突变类型。 第四页，共五十七页