结核病的实验室诊断技术及应用演示文稿.pptVIP

GeneXpert应用 1、TB复合群鉴定。 2、利福平耐药检测 。 3、WHO推荐 4、Xpert?MTB/RIF检测试剂的阳性检出率低于人们对分子生物学诊断试剂高敏感度的预期值，（1000CFU/ml） 现在是30页\一共有50页\编辑于星期五 DNA用于临床检验的不足 “死菌检测呈阳性”，与临床相关性差 不能区分“潜伏感染”“活动性感染” 易交叉污染 反应易受抑制 现在是31页\一共有50页\编辑于星期五 NASBA（国外） TMA（国外） SAT（国内） 四、常见的RNA检测技术 现在是32页\一共有50页\编辑于星期五 SAT技术是将核酸恒温扩增和实时荧光 检测相结合的一种新型RNA检测技术。 TB—SAT 检测技术 现在是33页\一共有50页\编辑于星期五 TB-RNA释放 恒温扩增 实时检测 超声波（300W） 15 min 痰液预处理 42℃ 40 min 与反应液混合 60℃10 min 42℃ 5 min TB-SAT操作流程 50 μl 稀释液 全程2小时，会做PCR，就学的会SAT 现在是34页\一共有50页\编辑于星期五 TB-SAT检测技术优点 现在是35页\一共有50页\编辑于星期五 RNA诊断技术的优势 灵敏度高：RNA ≥ DNA拷贝数 与临床相关性好：区分“死活菌”： 减少抗生素滥用 可以诊断“活动性感染”： 活动性感染：RNA转录活跃 潜伏感染：RNA不转录 不易污染：靶标和扩增产物都是RNA 现在是36页\一共有50页\编辑于星期五 TB-SAT检测区分MTB和NTM 结核分枝杆菌复合群（MTB）： 人型结核分枝杆菌 牛型结核分枝杆菌 非洲型结核分枝杆菌 非结核分枝杆菌（NTM）： 研究表明，TB-SAT可以区分如下NTM：堪萨斯分枝杆菌、胞内分枝杆菌、龟分枝杆菌、戈登分枝杆菌、海分枝杆菌等18种 Novel Real-Time Simultaneous Amplification and Testing Method To Accurately and Rapidly Detect Mycobacterium tuberculosis Complex J.Clin.Microbiol.2012,50(3):646.DOL:10.1128/JCM.05853-11. 现在是37页\一共有50页\编辑于星期五 活菌检测技术，可用作肺结核治疗效果评估 据文献报道：每个结核分枝杆菌含有约2000个拷贝rRNA 研究表明：rRNA与结核分枝杆菌的生活力有着很好的相关性， rRNA可以反映结核分枝杆菌的死菌活菌状态 研究表明：在用药治疗期内，随着结核分枝杆菌的死亡，rRNA大约在7天左右时间全部降解。而DNA含量几乎保持不变 VIVIAN JONAS,et al. JOURNAL OF CLINICAL MICROBIOLOGY, Sept.1993, p.2410-2416 CLAUDIO PIERSIMONI, et al. JOURNAL OF CLINICAL MICROBIOLOGY,Jan.1997, p.193–196. GABRIELLE M. E. ANTIMICROBIAL AGENTS AND CHEMOTHERAPY, Sept. 1994, p. 1959-1965 现在是38页\一共有50页\编辑于星期五 免疫法常有既往感染问题 SAT更有利于治愈判断 窗口期 时间示意 相对浓度示意 抗体 RNA DNA 病原体感染前后各检测靶标的含量变化 死菌的RNA快速降解，有助治愈判断 用药 治疗 DNA需要一段时间降解 RNA快速降解 现在是39页\一共有50页\编辑于星期五 相比DNA,RNA检测能更好的体现疗效 服用利福平和氧氟沙星后，第三天和第七天DNA和RNA的滴度变化，相比 DNA,RNA与药物浓度变化的符合率更高，RNA检测能更好的进行疗效评估。 GABRIELLE M. E. Assessment of Mycobacterial Viability by RNA Amplification. ANTIMICROBIAL AGENTS AND CHEMOTHERAPY, Sept. 1994, p. 1959-1965 DNA RNA 现在是40页\一共有50页\编辑于星期五 SAT与培养的监测结果一致， 可应用于疗效评估 监测项目 阳性患者数（%） 0月 0.5月 1月 2月 4月 6月 集菌涂片 150（100.0） 53（35.3） 20（13.3） 9（6.