武理工水处理生物学课件第7章 微生物的生长和遗传变异.pptxVIP

1第七章 微生物的生长和遗传变异第一节 微生物的生长及其特性第二节 微生物的遗传第三节 微生物的变异第四节 遗传工程第五节 微生物的驯化与保藏 2第一节 微生物的生长及其特性一、生长与繁殖的基本概念二、微生物生长的测定方法三、微生物的生长特性四、微生物膜的生长特性 3一、生长与繁殖的基本概念何谓生长？同化作用大于异化作用时，细胞质量增加，表现在细胞体积或重量的不断增加，这种现象称生长。何谓繁殖？生长一定程度后细胞分裂，这就是细菌的繁殖。个体的生长和繁殖体现为群体的生长。（微生物重量或数目的增加）。 群体生长＝个体生长＋个体繁殖在微生物学中“只有群体的重复”才更有意义，因此“生长”一般指群体生长。第一节 微生物的生长及其特性 4二、微生物生长的测定方法第一节 微生物的生长及其特性生理指标法计数法生物量法定量测定方法直接计数法（显微镜）间接计数法（关注：活细胞染色法、特定细胞计数法）体积法重量法（湿重法、干重法）组分法元素法呼吸强度耗氧量酶活性生物热 51. 计数法（1）直接计数法（显微镜）①涂片染色法： 一定量样品涂布在载玻片的已知面积内，染色后计数。②滤膜染色法： 一定量样品过滤到滤膜上，然后染色计数。计数之前都需把样品预处理分散第一节 微生物的生长及其特性 6③计数器法: 如血球计数板法④比例计数法： 将已知颗粒浓度的液体与待测菌液按一定比例混合后在显微镜下，测各自的数目。（特点：不需测量体积）第一节 微生物的生长及其特性 7全细胞染色法（死活不分）：DAPI染色，DTAF染色第一节 微生物的生长及其特性DNA2Cl-H2N+NH2CNHH2N -CNH2DAPI：4,6-二脒基-2-苯基吲哚（2）染色计数法OOHOOHOOHNHNNClNClDTAF：二氯三嗪基氨基荧光素 8美蓝染色法（酵母活细胞计数）活细胞：无色死细胞：蓝色吖啶橙染色法（紫外显微镜）活细胞：橙色荧光死细胞：绿色荧光活细胞染色法第一节 微生物的生长及其特性 9FormazanNHRNNR’NRC[H]甲撍化合物Tetrazolium chlorideNRRNNNCl-+R’四氮唑化合物（染料）四氮唑化合物（染料）染色法第一节 微生物的生长及其特性 10TTC：2,3,5-氯化三苯基四氮唑（triphenyl tetrazolium chloride）CNNNN+Cl-无色；被还原后生成红色的2,3,5-三苯基甲撍（TF）：Triphenyl formazanCNNHNN2H+HCl第一节 微生物的生长及其特性常用的四氮唑化合物（染料） 11CTC : 5-cyano-2,3-ditolyl tetrazolium chlorideCTCCl-NNNNCNCN3+CN3[H]第一节 微生物的生长及其特性CTCFNHNNNCCNCN3CN3CTCF : CTC-formazane 12双重染色法DTAF和CTC双重染色法10μm第一节 微生物的生长及其特性 13（3）间接计数法（活菌计数法）①平板计数法：根据每个活的微生物能长出一个菌落的原理设定的。 测定菌落数（注意：可培养的微生物很少） 描述：CFU（colony formation unit） ②液体计数法（MPN法，most probable number法）： 又称最可能数法，是根据统计学原理设计的。 主要用于在平板培养基上不易形成菌落的菌 （硝化菌、反硝化菌、硫酸还原菌）第一节 微生物的生长及其特性 14平板计数法 15③液膜法：过滤到滤膜上（把膜放在固体培养基上培养）适用空气或饮用水等微生物含量较低的样品。微孔滤膜不让微生物（细菌以上）通过，滤菌，将膜放在固体培养基表面培养，计数类似平板计数法。 16（4）特定微生物计数法平板法液体法e.g. Cr6+耐性微生物抗生素抗性菌亚硝酸菌、硝酸菌的计数②FISH（荧光杂交法）Fluoreseuce In situ hybridization 16sRNA的碱基组成—设计特异的探针（probe） ①选择性培养基法第一节 微生物的生长及其特性 17Principle of fluorescent in situ hybridization (FISH技术的原理)rRNAOligonucleotide probeFluorescence第一节 微生物的生长及其特性 18FISH方法的步骤萤光标示探针(Probe)渗透rRNA細胞Hybridization萤光显微镜观察、计数第一节 微生物的生长及其特性 1910μmFISH法DTAF染色案例：土壤中微生物的测定微生物同视