分子生物学实验.pptVIP

氨苄青霉素(Amp)配置： 无菌水配制氨苄青霉素成100 mg/mL 溶液，过滤除菌，-20oC冰箱保存； X-gal配置： 将X-gal溶于二甲基甲酰胺中，配成20 mg/mL浓度的溶液，装于玻璃或聚丙烯管中，以锡铂纸包裹避光保存于-20oC， X-gal不需要过滤除菌； IPTG配置： 将2 g IPTG溶于8 mL水中，用水调节体积到10 mL, 过滤除菌， -20oC冰箱保存。 现在是95页\一共有165页\编辑于星期四 固体LB平板的准备 1. 固体LB培养基的配置：每100 mL液体LB培养基加入1.2 g琼脂粉，pH 7.0，高温灭菌； 2. 固体LB培养基融化后，冷却到50oC，加入氨苄青霉素（100μg/mL），再倒入灭菌的平板内； 3.在LB固体培养基表面均匀投布4μL IPTG (200 mg/mL)和40μL x-gal (20mg/mL),吹干; 四 实验步骤 现在是96页\一共有165页\编辑于星期四 4. 从-70oC冰箱中取出感受态细胞,置冰上解冻； 5. 在超净台上，取5 ?l 连接产物加入到感受态细胞中，充分混匀，冰上放置30 min； 6. 42oC热激处理90 sec，热击后迅速置于冰上冷却3-5 分钟； 7.加入600－800 ?l无抗生素的LB液体培养基，37oC，50－60 rpm温育45 min，使