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块菌多糖的制备及其免疫调节活性研究 一、引言 块菌是一种真菌，它可以生长在树木、土壤和种子表面。块菌中含有多种生物活性物质，如多糖、蛋白质和多酚等。其中，块菌多糖具有重要的药用和免疫调节作用。块菌多糖具有调节人体免疫系统的功能，可以增强机体免疫力，对癌症、传染病、自身免疫性疾病等疾病的治疗和预防具有重要的价值。因此，块菌多糖的制备及其免疫调节活性研究具有重要的意义。 二、材料和方法 1、实验材料 本实验所用材料包括枸杞等块菌，乙醇、石油醚、蒸馏水、氯仿等化学试剂，兔血白蛋白、小鼠巨噬细胞株等。 2、制备块菌多糖 （1）粗提 将块菌粉末加入1倍体积的乙醇中，反复搅拌均匀，静置1小时。离心后，将草浸于乙醇中，再次搅拌，重复此步骤约3-4次，在加入大量蒸馏水后。草露浓缩于真空下至膏状，取膏状物质加入石油醚，搅拌均匀，通入硫酸氢气，酸解。再次用蒸馏水消化，加入恰当量的酒精沉淀，将沉淀物取出后冷冻干燥。 （2）分离纯化 将块菌多糖溶液过0.45 μm毛细孔滤器，然后使用DEAE-52和Sephadex-G-75树脂柱进行分离纯化，使用蒸馏水为流动相，流速为0.5 mL/min。在纯化过程中，使用紫外光检测多糖分子的浓度，确定分离峰。每个分离带分别收集，冻干后保存。 3、免疫调节活性测试 （1）测定体外基因转录 将小鼠巨噬细胞株接种在培养皿中，每个孔接种1×106个细胞，耗时1天。加入各种剂量