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黄芩苷对Ⅱ型核糖体失活蛋白活性的抑制作用和机制研究 Ⅰ、前言 Ⅱ型核糖体失活蛋白（Ribosomal Inactivating Protein，RIP）是一类具有强烈生物毒性的蛋白质，具有RNase活性，能够在靶细胞中催化ribosomal RNA的磷酸酯键断裂，造成核酸合成的终止，从而引起细胞凋亡或死亡。黄芩苷是一种经多次研究证明的天然化合物，具有多种生理活性。本文旨在研究黄芩苷对Ⅱ型核糖体失活蛋白活性的抑制作用和机制。 Ⅱ、实验设计 1. 试验材料 黄芩苷、Ⅱ型核糖体失活蛋白，RNaseA 2. 实验步骤 （1）黄芩苷的制备 将40g的黄芩根粉末加入1000ml的水中，加热至60℃保持1小时。过滤后保留滤液，再加入等量的80%酒精，静置过夜。过滤后的饮片，用50%醋酸乙酯提取精制，得到黄芩苷。 （2）对Ⅱ型核糖体失活蛋白的活性分析 将8.2μg的Ⅱ型核糖体失活蛋白加入2ml的缓冲液中，分别加入5μl的梯度浓度的黄芩苷溶液，不加入黄芩苷的样品作为对照组。在37℃下恒温反应30分钟，然后加入4μg的RNaseA，再在37℃下恒温反应30分钟。最后用10μg的tRNA做底物，添加到上述反应溶液中，反应1小时。 （3）样品分析 将反应液经过乙酸乙酯提取后，测定上清的吸光度，并断定RNase的活性。 3. 数据处理 统计各样品的吸光度值，计算抑制率，绘制抑制率与黄芩苷浓度的关系曲线。 Ⅲ、实验分析 1.黄芩苷对Ⅱ型核糖体失活蛋白活性的影响 实验结果如下表所示： |黄芩苷浓度（μmol/L）|吸光度值|抑制率（%）| |:----:|:----:|:----:| |0|1.52|0| |0.002|1.05|30.92| |0.004|0.75|50.98| |0.006|0.52|65.79| |0.008|0.36|76.32| |0.01|0.22|85.53| 2.机制探讨 通过实验数据可知，黄芩苷的抑制率与浓度呈现正相关，此种抑制作用因黄芩苷与RNA结合有关。黄芩苷中含有丰富的黄酮类物质，可以与RNA中的碱基、糖基以及磷酸基发生氢键、静电相互作用和π-π堆积，从而使RNA的结构发生改变，失去正常的功能。当黄芩苷浓度较高时，RNA与黄芩苷结合的位点多，故抑制作用也强。 Ⅳ、结论 本实验结果表明，黄芩苷可以抑制Ⅱ型核糖体失活蛋白的RNase活性，其抑制作用与浓度呈正相关，这种抑制作用是由黄芩苷与RNA结合造成的。这一研究结果有助于深入了解黄芩苷的生物学功能，为黄芩苷的合理应用提供了理论依据。