生物化学课件DNA复制与修复.pptxVIP

生物化学课件DNA复制与修复第1页/共56页 2 在宿主细胞中一些RNA病毒能以自身的RNA为模板复制出新的病毒RNA，还有一些RNA病毒能以自身RNA为模板逆转录合成DNA。 遗传信息以密码的形式储存在DNA分子上，表现为特定的核苷酸排列顺序。 在细胞分裂过程中，通过DNA的复制把亲代细胞的遗传信息传递给两个子代细胞。在子代细胞的生长发育过程中，这些遗传信息通过转录传递给RNA，再由RNA翻译转变成相应的蛋白质，由蛋白质执行各种各样的生物学功能，使后代表现出与亲代相似的遗传特征。第2页/共56页 3遗传的中心法则 ——总结了生物体内遗传信息的流动规律 揭示遗传的分子基础，不仅使人们对细胞的生长、发育、遗传和变异等生命现象有了更深刻的认识，而且以此为基础发展起来的基因工程，给人类的生产和生活带来了巨大的影响。第3页/共56页 41、 半保留复制 DNA复制时，以亲代DNA的两条链分别作为模板，在DNA聚合酶的催化下，按碱基互补的原则合成两条与模板链互补的新链，组成新的DNA分子。新形成的两个DNA分子与亲代DNA分子的碱基顺序完全一样。由于子代DNA分子中一条链来自亲代，而另一条链是新合成的，因此这种复制方式称为半保留复制(semi-conservative replication)。二、DNA复制的特点第4页/共56页 5 DNA 半保留复制的实验依据1958年Meselson stahl，用同位素示踪标记加密度梯度离心技术实验证明了DNA是采取半保留的方式进行复制15N培养基14N培养基14N培养基第5页/共56页 6ABC 1963年，Cairns 用放射自显影的方法首次观察到完整的正在复制的大肠杆菌染色体DNA。 将3H-胸苷标记大肠杆菌DNA近两代的时间，使3H-胸苷掺入大肠杆菌DNA中。然后用溶菌酶把细胞壁消化掉，使完整的大肠杆菌染色体DNA释放出来，再通过放射自显影，得到下图。非复制部分（C）银粒子密度较低，由一股放射性链和一股非放射性链构成。已复制部分站整个染色体的三分之二，其中一条双链（ B ）仅有一股链有标记，另外一股双链（ A ）的两股链都有标记，银粒子密度为前二者的两倍。复制中的大肠杆菌染色体放射自显影图 (Caims实验)CAB第6页/共56页 72、有一定的复制起点 基因组能独立进行复制的单位，称为复制子（replicon）。每个复制子都含有控制复制的起点（origin），可能还有复制终点（terminus）。DNA的复制是在起始阶段进行控制的，一旦复制开始，就延续到完成复制为止。原核生物中的复制起始点通常为一个，而真核生物中为多个。 大肠杆菌的复制起点（ori C），由245bp构成，关键序列在于三个13bp的序列和四个9bp的序列。GATCTNTTNTTT成串排列的三个13bp序列共有序列共有序列TTATCCACA DnaA蛋白结合位点四个9bp序列大肠杆菌DNA复制起点成串排列的重复序列第7页/共56页 83、需要引物 DNA聚合酶必须以一段具有3’端自由羟基（3’-OH）的RNA作为引物(primer) ，才能开始合成子代DNA链。 RNA引物的大小，在原核生物中通常为50~100个核苷酸，而在真核生物中约为10个核苷酸。RNA引物的碱基顺序，与其模板DNA的碱基顺序相配对。第8页/共56页 94、多为双向复制 双向复制：多数复制从起始点向2个方向进行复制，有2个复制叉。 单向复制：少数复制从起始点向1个方向进行复制，只有1个复制叉。DNA双向复制：在复制过程结束前加入3H，通过放射自显影观察标记（红色），判断复制是双向还是单向。第9页/共56页 10 3H标记大肠杆菌DNA结果表明两条链是同时复制的（红色表示新合成的链），电镜下观察到的复制过程，正好与放射自显影上所显示的相符。DNA双向复制可视图二：第10页/共56页 115、半不连续复制 由于DNA聚合酶只能以5→3方向聚合子代DNA链，即模板DNA链的方向必须为3→5。因此，分别以两条亲代DNA链作为模板聚合子代DNA链时的方式是不同的。(leading strand)(lagging strand)第11页/共56页 12 以3→5方向的亲代DNA链作模板的子链，在复制时连续合成，子链的聚合方向为5→3 ，这一条新合成的子链被称为前导链(leading strand)或领头链。以5→3 方向的亲代DNA链为模板，合成子链的过程不连续，这条链被称为随从链(lagging strand)或滞